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[目 的]原发性高血压已成为全球流行性疾病,是心脑血管疾病的重要危险因素,也是慢性肾脏疾病的主要原因之一。高血压病的病理机制复杂,其中钠肽家族及其受体的基因在高血压病的病理机制中有着举足轻重的作用。前人的研究发现高血压病患者的NPR3基因rs1173747位点多态性影响NPR3的转录表达,且与血压升高具有相关性。有研究发现,在人类左心室的心肌细胞中miR143靶向负调控NPR3,但rs1173747位点多态性是否影响miR143的调控效应?NPR3基因rs1 173747位点多态性和miR143靶向负调控NPR3是否影响NPR3受体配体结合及其下游效应分子水平?关于此类问题,目前尚不明了。为此,本研究选择高血压病患者和健康人群为研究对象,探讨NPR3基因rs1173747位点多态性和miRNA143在高血压病理机制中的作用,试图求证上述问题。[方法]1.选取研究对象及采集样本2019年6月至9月选取心内科二病区病人中的原发性高血压患者和在本院体检中心进行健康体检的健康人群各100例,分别作为病例组和对照组。病例组:父系、母系三代均为汉族定居住在云南省范围内,年龄在40-80岁之间,并确诊为原发性高血压的患者。排除继发性高血压病的患者,剔除信息不详细者,及未能检测出观察指标者。对照组:父系、母系三代均为汉族定居住在云南省范围内,收缩压<140mmHg、舒张压<90mmHg,无其它心血管疾病,年龄在40-80岁之间。对符合条件的人群进行问卷调查,完善个人信息和生化指标检测,签署知情同意书,并收集血清标本和全血标本。2.AS-PCR法检测两组研究对象NPR3基因rs1 173747位点多态性查阅NPR3基因rs1173747位点基因序列,设计与合成AS-PCR特异性引物。优化NPR3基因rs1173747位点多态性检测PCR反应体系与扩增条件。用优化后AS-PCR方法检测研究对象NPR3基因rs1 173747位点多态性,即:使用离心柱法提取研究对象全血样本DNA,将模板DNA加入到含有特异引物的PCR反应液中,设定PCR反应程序,进行目的片段的扩增。扩增产物加入琼脂糖凝胶的点样孔中,进行电泳,并对电泳结果进行分析,判断基因型别。3.检测血清miR143依据NPR3基因rs1173747位点多态性分型情况与临床基本信息,在两组研究对象中各选取对等的50例标本,使用离心柱法提取血清样本miRNA,在分光光度仪里检测miRNA的纯度和浓度,将一定体积的miRNA加入到逆转录反应液里,设置逆转录程序,进行逆转录反应。将一定体积的逆转录产物cDNA加入到RT-PCR反应液中,并加入特异的miR143引物,设置RT-PCR反应程序,进行目的片段的扩增,扩增结束后查看并分析CT值,以U6作为内参同时扩增,计算血清样本miR143相对表达量。4.检测血清 ANP、NO、VEGF、ET-1 和 cAMP 水平依据NPR3基因rs1173747位点多态性分型情况,在两组研究对象中各选取已检测miR143相对表达量的44例标本,用进口 ELISA试剂盒,依照说明书进行血清ANP、NO、VEGF、ET-1和cAMP浓度检测。5.统计方法使用SPSS Statistics 17.0统计学软件包对数据进行统计分析。NPR3基因SNPs基因型和等位基因的人群分布频率采用直接计数法,并用卡方检验分析两组之间差异的统计学意义。采用四分位间距表示研究对象血清ANP、NO、cAMP、VEGF、ET-1浓度水平,使用秩和检验分析两组间差异的统计学意义。用均值±标准差表示血清miR143相对表达量,用两独立样本t检验分析两组间差异的统计学意义。用pearson相关性分析研究对象血压与血清ANP、NO、cAMP、VEGF、ET-1、miR143相关性。研究对象血清ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF分别与miRNA143进行单因素回归分析,血压与ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF和miRNA143进行多因素回归分析。[结果]1.200例研究对象中共检出AA基因型83例,AC基因型100例,CC基因型17例;病例组AC基因型和C等位基因频率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.分别对50例病例组和50例对照组(AA基因型携带者、AC基因型携带者各25例)样本进行了血清miR143表达水平检测,结果显示病例组血清miR143相对表达水平为0.97±0.04,低于对照组1.07±0.09,差异具有统计学意义(t=-7.286,p=0.000)。3.分别对病例组和对照组各44例研究对象进行了血清ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平检测,结果显示病例组血清ANP、cAMP浓度水平低于对照组,ET-1和VEGF水平高于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。4.分析NPR3基因rs1173747位点多态性对血清ANP、NO、VEGF、ET-1、cAMP浓度水平的影响,结果显示AC基因型携带者血清ANP浓度水平高于AA基因型,差异有统计学意义,p<0.05。其中,对照组AC基因型携带者血清ANP浓度水平大于AA基因型携带者;VEGF水小于AA基因型携带者,p<0.05。5.分析NPR3基因rs1173747位点多态性对血清miRNA143表达水平的影响,结果显示AC基因型携带者miRNA143表达水平高于AA携带者,差异有统计学意义,p<0.05。6.分析miRNA143表达水平对血清ANP、cAMP、NO、ET-1、VEGF浓度水平的影响,结果显示88例研究对象中血清ANP浓度水平与miRNA143表达呈正相关。其中,44例AC基因型携带者ANP与miRNA143呈正相关;VEGF与miRNA143呈负相关;回归分析结果一致。7.分析血清miRNA143对血压的影响,结果显示88例研究对象SBP和DBP与miR143呈负相关,其中,AA基因型携带者仅DBP与miR143呈负相关;AC基因型携带者SBP和DBP与miR143均呈负相关。回归分析结果一致。8.以高血压病发生与否为因变量,以NPR3基因rs1173747位点基因型、血清 miRNA143、ANP、cAMP、NO、ET-1、VEGF 为自变量进行 logistic 回归分析,结果显示rs1 173747位点基因型、ANP和miR143与高血压病偏回归系数具有统计学意义。[结 论]1.NPR3基因rs1173747位点多态性和miR143可能参与了血压调节。2.miR143可能通过对NPR3基因转录子的调节,进而影响NPR3/ANP受体配体效应。3.NPR3基因rs1173747位点多态性可能影响miR143对NPR3基因转录子的调节效能。4.高血压病理机制中上述作用可能发生改变。