目的:胸腺瘤是最常见的一种前纵隔肿瘤,组织学类型较多,病程较长,疗效相对较好,但因各种类型均可发生侵袭性生长,仍是一种恶性肿瘤,且其常合并多种自身免疫性疾病,最常见是重症肌无力,严重影响患者生活质量。Wnt信号通路通过调节FOXN1的表达来控制胸腺上皮细胞的发育。前期研究表明,Wnt4及FOXN1在胸腺瘤中高表达,与胸腺瘤关系密切,为了确定胸腺瘤中Wnt4与FOXN1的调控关系及二者下调后对胸腺瘤细胞凋亡的影响,本研究首先通过si RNA干扰下调人胸腺瘤细胞中Wnt4及其通路因子的表达,并通过PCR以及Western-Blot方法确检测胸腺瘤细胞中FOXN1的m RNA及蛋白表达水平,进而确定Wnt4在胸腺瘤中通过FOXN1信号转导通路发挥作用。其次通过流式细胞学方法检测分别下调Wnt4和FOXN1的表达后二者对胸腺瘤细胞凋亡能力的影响,探讨二者对胸腺瘤的发展的促进作用。.方法:1、根据基因库中人Wnt4、JNK、Tcf-4及FOXN1 c DNA序列构建并合成Wnt4-si RNA、JNK-si RNA、Tcf-4-si RNA及FOXN1-si RNA,针对每个基因,合成3对si RNA,体外培养胸腺瘤细胞以Lipofectamine TM 2000为媒介并用靶向Wnt4,JNK、Tcf-4和FOXN1基因的si RNA转染。采用普通PCR检测转染后Wnt4、JNK及Tcf-4的表达,筛选出分别对Wnt4、JNK、Tcf-4以及FOXN1基因干扰效果最佳的si RNA进行后续相关实验,检测干扰每组基因后,通过RT-q PCR和Western-bloting分析胸腺瘤组织中FOXN1 m RNA和蛋白质水平。2、将Wnt4-si RNA及FOXN1-si RNA转入体外培养的人胸腺瘤细胞中,采用流式细胞学方法分别检测Wnt4基因及FOXN1表达降低后对胸腺瘤细胞凋亡情况的影响。结果:1、与对照组相比,Wnt4-si RNA、JNK-si RNA、Tcf-4-si RNA及FOXN1-si RNA中干扰效果最佳的分别为Wnt4-986、JNK-722、Tcf-4-1717及FOXN1-1069,抑制率分别为56.7%,72.6%,63.2%和52.3%。同时分别下调Wnt4及JNK基因后,人胸腺瘤细胞中FOXN1的m RNA及蛋白表达量均较对照组显著下降(P<0.05),且两者之间变化趋势一致,而下调Tcf-4基因后,FOXN1的m RNA和蛋白表达量均与对照组无明显差异。2、与对照组相比,干扰Wnt4基因和转录因子FOXN1后,人胸腺瘤细胞发生凋亡的数量明显增加,凋亡率分别为10.33±0.51%和10.65±0.55%,较对照组(5.12±0.23%)和Lipo2000组(5.58±0.23%)差异有统计学意义(P<0.05),对照组和lipo组之间相比无差异(P>0.05)。结论:1、各组si RNA中Wnt4-986、JNK-722、Tcf-4-1717及FOXN1-1069分别能够显著的抑制Wnt4、JNK、Tcf-4及FOXN1基因的表达。利用si RNA技术分别干扰体外培养的人胸腺瘤细胞系中Wnt4、JNK基因后,转录因子FOXN1的表达量均明显降低,提示Wnt4基因及JNK基因在胸腺瘤细胞系中对下游的FOXN1具有调控作用,同时证实了在体外培养的胸腺瘤细胞内转录因子FOXN1的表达可能是通过非经典Wnt/JNK通路而实现的。2、干扰人胸腺瘤细胞中Wnt4基因及转录因子FOXN1均能促进胸腺瘤细胞的凋亡,提示Wnt4基因及转录因子FOXN1的表达增加可能与胸腺瘤的发生发展相关,同时表明Wnt4基因是通过转录因子FOXN1对胸腺瘤发挥作用的。