水稻是重要的经济作物,世界上三分之一的人口都以水稻为主食。目前水稻已完成全基因组测序,所以常常做为重要的模式植物进行研究。在农业生产中,各种非生物胁迫如高盐、干旱、冷害等成为影响粮食产量的重要因素。因此,对水稻进行抗逆性相关研究,对弄清楚水稻抗逆机理,以及水稻产量的提高,都有十分重要的意义。OsSCL30b是本实验室令狐黔艳筛选出的一个水稻基因。该基因所编码的蛋白属于RRM家族。RNA识别基序(RRM),也称为核糖核蛋白结构域(RNP)或RNA结合结构域(RBD)。该蛋白质结构域对于RNA分子与特异物质和结构域的结合是不可或缺的。RNA识别基序是真核生物中广泛存在的蛋白质结构域。真核RRM蛋白质存在于所有转录后事件:前mRNA加工,替代剪切,mRNA稳定性,RNA编辑,mRNA输出,前rRNA复合物形成和降解。RRM蛋白存在于在植物中的叶绿体中,并参与叶绿体mRNA的3’末端加工。OsSCL30b的转基因植株在田间的生长表现出比日本晴的生育期更迟。为研究OsSCL30b水稻转基因植株生育期推迟的机理,本研究以OsSCL30b基因编码的OsSCL30b为诱饵蛋白,通过酵母双杂交,从日本晴cDNA文库筛选出了一些与OsSCL30b相互作用的蛋白,从中挑选一个命名为OsHAD1的进行研究。HAD超家族以卤代酸脱卤酶原酶命名,包括各种水解酶,包括磷酸酶,磷酸化酶和磷酸葡萄糖变位酶。该蛋白家族成员在拟南芥中参与甘油代谢和糖酵解磷酸途径磷脂中间体的代谢。对该基因的生物信息学分析表明,该基因的启动子区域有许多逆境相关的作用元件,推测其在逆境生理中可能存在一定的抗逆作用。基于此,本研究主要探索了该基因在逆境下的表达。为研究其对OsSCL30b所起的作用以及水稻生育期延迟与逆境生规的关系提供依据。主要实验结果如下:1.OsHAD1基因编码283个氨基酸,等电点5.23。上游启动子中的顺式作用元件有ABRE、LTR、MBS、TGACG和CGTCA、TCA-e1ement等,多与逆境相关。对三叶期的日本晴进行不同时间的逆境处理,提取cDNA通过RT-PCR发现该基因能被不同逆境诱导,在低温和干旱下尤其明显。2.通过构建OsHAD1基因的原核表达载体,并对其进行了体外诱导表达,同时探究了表达OsHAD1蛋内的大肠杆菌在逆境条件下的生长状况,结果显示该基因的表达能增强大肠杆菌对高温和低温的耐受性,降低了大肠杆菌对干旱、盐的耐受性。3.构建OsHAD1基因的超表达载体,构建OsHAD1基因的抑制表达载体,通过农杆菌侵染法转入水稻愈伤组织,经过分化得到转基因植株。并通过潮霉素浸泡检测和潮霉素引物及35S引物检测为正确阳性转基因植株。为进一步研究OsHAD1蛋白在真核生物水稻中的作用提供了材料。