【摘 要】
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目的:研究携带吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)的肝细胞在同种异体脾内的表达及作用机制。方法:BABL/c肝细胞移植C57BL/6小鼠脾内,随机分为四组:Ⅰ组:携
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目的:研究携带吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)的肝细胞在同种异体脾内的表达及作用机制。方法:BABL/c肝细胞移植C57BL/6小鼠脾内,随机分为四组:Ⅰ组:携带IDO腺病毒组;Ⅱ组:携带IDO腺病毒+1-MT(1-甲基色氨酸)组;Ⅲ组:空壳腺病毒;Ⅳ组:单纯肝细胞移植。转染后36-48小时采用门静脉灌注法分离肝细胞并离心进行纯化,荧光显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,计算转染率,用台盼蓝拒染法检查细胞活性,分别用RT-PCR、Western Blot技术对IDO的表达情况进行检测。将肝细胞进行脾内移植,术后2、5日处死小鼠取脾脏,做免疫组化检测IDO表达情况,并进一步做TUNEL检测脾脏淋巴细胞凋亡情况。结果:成功分离并纯化肝细胞,数量为1.62×108/只,转染率为24.7%,活性为95%。RT-PCR、Western- Blot可以检测到IDO基因及蛋白质表达。免疫组化显示Ⅰ组脾脏有IDO阳性的肝细胞。TUNEL显示Ⅰ组与与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带IDO的肝细胞能在同种异体脾内稳定表达,并能诱导脾内淋巴细胞的凋亡。
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