牛磺酸对异位性皮炎患者Th1/Th2细胞的作用及其机制研究

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目的: 异位性皮炎多在儿童期发病,目前在治疗上尚有一定的困难,牛磺酸为儿童期必需的氨基酸,本研究通过检测异位性皮炎患者、健康人群血清中牛磺酸水平,探讨人体血清牛磺酸水平与异位性皮炎发病的关系;通过检测牛磺酸对异位性皮炎患者Th1/Th2细胞因子的作用,探讨牛磺酸治疗异位性皮炎的作用机理。 方法: 1、应用高效液相色谱法(HPLC)检测异位性皮炎患者及正常人群(各30例)血清中牛磺酸水平。回收率为96%-97%。 2、临床资料收集:初诊的异位性皮炎患者(符合Williams诊断标准)及正常对照者。其中异位性皮炎患者48例,健康对照42名(含前面病例数)。 3、应用MTT法观察牛磺酸对异位性皮炎患者PBMC增殖活性的影响。 4、外周血淋巴细胞的培养:用等密度梯度离心法分离外周血单一核细胞,用10%FCS-1640培养液悬浮,24孔培养板体外培养AD患者、健康人PBMC,实验组加入牛磺酸,同时设对照组,两组均加入PHA,终浓度为40μg/ml,置5%CO2,37℃培养箱中培养48小时。 5、细胞因子的收集和ELISA检测:收集培养细胞上清液,储存于-70℃冰箱集中检测。应用ELISA法检测培养上清液中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的水平。操作方法按试剂盒说明书提供的步骤进行。 5、统计学处理:实验数据用SPSS10.0处理,用t检验、方差分析进行组间比较。 结果: 1、血清牛磺酸水平的检测:AD患者血清中牛磺酸的含量(6.25±0.79μg/ml),显著低于正常对照组(10.32±0.65μg/ml),具有显著的统计学意义(P<0.01)。2、牛磺酸在对异位性皮炎患者PBMC的增殖作用有剂量效应趋势,低浓度促进增殖,高浓度抑制增殖,在浓度为40mmol/1是促增殖作用最明显。3、培养上清液中细胞因子的检测结果:(1)IL-2的水平:AD病人PHA组为655.67±610.15pg/ml,牛磺酸组为1410.97±378.31pg/ml,两者具有显著的统计学差异:健康人PHA组为309.54±145.917pg/ml,牛磺酸组为670.77±614.21pg/ml。(2)IL-4的水平:AD病人PHA组为38.66±26.85pg/ml,牛磺酸组为52.30±32.52 pg/ml;
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