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乳腺癌转移是乳腺癌引发死亡的主要原因。上皮间充质转化(EMT)和乳腺癌的转移密切相关。HnRNP A2/B1作为重要的功能调控蛋白,在人类多种癌症进程中起到关键作用,但对乳腺癌转移研究及其分子机制尚不明确。本文从细胞、动物以及临床水平研究了 HnRNP A2/B1的表达水平与乳腺癌转移的相关性:利用CRISPR/Cas9基因编辑系统,构建稳定敲除HnRNPA2/B1基因的MDA-MB-231和MCF-7细胞系,从细胞水平上检测HnRNP A2/B1对乳腺癌细胞EMT以及侵袭和转移的影响;通过构建裸鼠实验性肺转移模型和自发性肺转移模型,在体内检测分析HnRNP A2/B1的表达变化对乳腺癌细胞转移能力的影响;利用生物信息学分析临床样本的高通量芯片,探究不同迁移水平乳腺癌的HnRNP A2/B1的表达变化。此外,利用SILAC技术标记敲除以及未敲除HnRNPA2/B1的稳定株,得到的差异蛋白进行生物信息学分析;并通过RNA免疫沉淀实验验证差异蛋白Profilin与HnRNP A2/B1的关系,进一步探究HnRNP A2/B1在乳腺癌细胞EMT侵袭和转移的作用机制。本研究成功敲除人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞系HnRNP A2/B1基因;通过观察敲除HnRNP A2/B1的乳腺癌细胞的形态,发现HnRNP A2/B1的表达与乳腺癌细胞的形态、细胞骨架显著相关;通过流式细胞术实验发现敲除HnRNPA2/B1的乳腺癌细胞F-actin聚合能力增强;通过体外侵袭迁移小室、免疫印迹、实时定量PCR实验发现敲除HnRNP A2/B1促进乳腺癌侵袭和迁移,促进EMT的转化,下调上皮标志物E-cadherin、上调间充质标志物N-cadherin和 Vimentin,上调 E-cadherin 的转录抑制因子 Snail、Twist、ZEB1/2 的 mRNA水平;同一个乳腺癌野生型细胞群体中,高迁移能力细胞中的HnRNP A2/B1表达比低迁移能力细胞低;高迁移能力的乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)中,HnRNP A2/B1的表达也要比低迁移能力的细胞系(MCF-7)低。通过构建裸鼠被动肺转移模型和自发肺转移模型,发现敲除HnRNP A2/B1后小鼠皮下成瘤能力显著降低,但在被实验性肺转移和自发性肺转移实验中裸鼠肺部结节以及转移恶性程度显著增强,促进了乳腺癌细胞的体内转移。利用生物信息学分析临床样本的高通量芯片,发现高迁移乳腺癌中HnRNPA2/B1的表达水平显著低于原位乳腺导管病变的表达。此外,敲除与未敲除HnRNP A2/B1的差异蛋白网络研究结果显示,HnRNP A2/B1的差异蛋白主要涉及到的与EMT相关的KEGG信号通路有:肌动蛋白骨架的调控、细胞黏附、胞外基质受体相互作用、MAPK等,并且利用RNA免疫沉淀、实时定量PCR实验探究了 HnRNP A2/B1与Profilin蛋白的关系,发现HnRNP A2/B1可以结合Profilin的mRNA并调控其表达,进而影响EMT的进程。上述结果证实了 HnRNPA2/B1是乳腺癌EMT的负调控因子,它的表达水平与乳腺癌细胞的转移能力呈负相关。并初步揭示了一种新的HnRNP A2/B1调控分子机制:HnRNP A2/B1可能通过Profilin影响细胞骨架的组装,从而抑制乳腺癌的迁移能力。该结果有助于更深入的理解HnRNP A2/B1介导的乳腺癌转移的机制,为临床乳腺癌转移的治疗与药物研发提供重要的理论依据。