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研究目的：通过观察高糖、糖基化终产物（advanced glycation end products，AGEs）等不同的刺激作用下对人牙周膜成纤维细胞(human periodontalligament fibroblasts，hPDLFs)增殖和凋亡情况及对IL-1β、IL-6、TNF-、IFN-γ表达水平的影响，并使用RT-PCR（reverse transcriptase-polymerase chainreaction，RT-PCR）方法检测细胞NF-κB的表达水平，初步了解糖尿病患者牙周组织局部AGEs对患者牙周组织局部破坏的机制，并与单纯的高糖刺激对比，试图证明AGEs对牙周组织破坏和抑制修复的作用是更为关键的影响因素与机制，以期为临床治疗糖尿病伴慢性牙周炎患者提供可靠的基础理论依据。研究方法：选取因正畸治疗而拔除的前磨牙，体外分离培养人牙周膜成纤维细胞，采用浓度为100μg/mlAGEs分别与高、低葡萄糖DMEM培养液混合，设立四个细胞组，L组为阴性对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、H组为高糖组（25mmol/L葡萄糖）、L+A组（低糖+100μg/mlAGEs组）、H+A组（高糖+100μg/mlAGEs组）。设立12、24和36h三个时间点，分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测人牙周膜成纤维细胞在不同刺激下细胞增殖及凋亡的情况；使用酶联免疫吸附法检测不同刺激下人牙周膜成纤维细胞IL-1β、IL-6、TNF-、IFN-γ的表达水平，及相同时间不同AGEs浓度梯度（10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml）下IL-1β、IL-6、TNF-、IFN-γ的表达水平；使用RT-PCR检测各组细胞NF-κB mRNA的表达。使用SPSS19.0软件对数据进行方差分析检验，实验结果以±s表示，p<0.05为有统计学意义。研究结果：1.不同刺激对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响1)细胞生长曲线人牙周膜成纤维细胞在四种不同培养基条件下，高糖、AGEs均能抑制细胞的增殖，其中H+A组细胞生长速度最为缓慢。2)细胞周期四组细胞增殖能力相互比较均有统计学意义（p<0.05），H+A组抑制细胞增殖能力最强。2.不同刺激时间各组细胞IL-1β、IL-6、TNF-、IFN-γ的表达及相同时间不同AGEs浓度梯度下IL-1β、IL-6、TNF-、IFN-γ的表达水平。1)不同刺激时间各组细胞IL-1β的表达a组内比较：L组各时间点相互比较IL-1β的表达均无统计学意义（p>0.05）；H组24h和36h与12h比较IL-1β的表达均有统计学意义（p<0.05）；L+A组各时间点比较IL-1β的表达均有统计学意义（p<0.05）；H+A组36h与12h、24h比较IL-1β的表达均有统计学意义（p<0.05）。b组间比较：12h时，除H组和L+A组比较无统计学意义外，其余各组相互比较IL-1β的表达均有统计学意义（p<0.05）；24h时，除L+A组和H+A组比较IL-1β的表达无统计学意义外，其余各组相互比较IL-1β的表达均有统计学意义（p<0.05）；36h各组相互比较IL-1β的表达均有统计学意义（p<0.05）。2)不同刺激时间各组细胞IL-6的表达a组内比较：L组组内各时间点比较IL-6的表达均无统计学意义(p>0.05)；H组组内各时间点比较IL-6的表达均无统计学意义(p>0.05)；L+A组组内各时间点比较IL-6的表达均有统计学意义(p<0.05)；H+A组组内各时间点比较IL-6的表达均有统计学意义(p<0.05)。b组间比较：12h时除L+A组和H+A组比较IL-6的表达无统计学意义(p>0.05)，其余各组比较均有统计学意义(p<0.05)；24h时除L+A组与H+A组比较IL-6的表达无统计学意义(p>0.05)，其余各组比较均有统计学意义(p<0.05)；36h时各组比较IL-6的表达均有统计学意义(p<0.05)。3)不同刺激时间各组细胞TNF-的表达a组内比较：L组各时间点比较TNF-的表达均无统计学意义(p>0.05)；H组除12h和24h比较TNF-的表达无统计学意义，其余时间点比较均有统计学意义(p<0.05)；L+A组除12h和24h比较TNF-的表达无统计学意义，其余时间点比较均有统计学意义(p<0.05)；H+A组各时间点比较TNF-的表达均有统计学意义(p<0.05)。b组间比较：12h时L组和H组、L组和L+A组、L组和H+A组比较TNF-的表达有统计学意义(p<0.05)；24h时除H组和L+A比较TNF-的表达无统计学意义，其余各组比较TNF-的表达均有统计学意义(p<0.05)；36h时各组之间比较TNF-的表达均有统计学意义(p<0.05)。4)不同刺激时间各组细胞IFN-γ的表达a组内比较：L组12h和36h时比较IFN-γ的表达有统计学意义(p<0.05)；H组、L+A组、H+A组各时间点比较IFN-γ的表达均有统计学意义(p<0.05)。b组间比较：各时间点各组间比较IFN-γ的表达均有统计学意义(p<0.05)。5)相同时间不同浓度AGEs刺激下H+A组细胞因子的表达a IL-1β：100μg/ml AGEs时IL-1β的表达与10μg/ml、50μg/ml AGEs的IL-1β表达比较均有统计学意义(p<0.05)；b IL-6：10μg/ml时IL-6的表达与100μg/ml时IL-6的表达比较有统计学意义(p<0.05)。c TNF-：100μg/ml时TNF-的表达与10μg/ml、50μg/ml AGEs的TNF-表达比较均有统计学意义(p<0.05)；d IFN-γ：各浓度之间比较IFN-γ的表达均有统计学意义(p<0.05)。3.不同环境下人牙周膜成纤维细胞NF-κB mRNA的表达及凋亡的影响1) L组各时间点NF-κB的基因表达比较无统计学意义(p>0.05)；2) H组36h时NF-κB基因表达明显高于12h、24h的NF-κB基因表达，有统计学意义（p<0.05）；3) L+A组、H+A组各时间点NF-κB基因表达比较均有统计学意义（p<0.05），且L+A组、H+A组NF-κB基因表达随时间的延长而增高，结果提示NF-κB的表达具有时间依赖性；4)在24h、36h时L+A组、H+A组的NF-κB基因表达均高于H组，差异有统计学意义（p<0.05）。5) L+A组、H+A组可加速细胞的凋亡。结论：1. AGEs能够明显的抑制人牙周膜成纤维细胞增殖。2. AGEs能够刺激人牙周膜成纤维细胞高表达IL-1β、IL-6、TNF-、IFN-γ，并与时间和浓度呈一定的依赖性。3. AGEs能够上调人牙周膜成纤维细胞的NF-κB表达并呈一定时间依赖性。4. AGEs可加速人牙周膜成纤维细胞的凋亡。