论文部分内容阅读
目的:探讨ubiquitin specific protease 3(USP3)经由murine double minute 2(MDM2),促进肝癌细胞增殖的分子机制,为USP3作为肝癌分子靶向治疗的靶点提供实验依据。方法:1、免疫共沉淀技术检测内源性USP3与MDM2在肝癌细胞株Hep G2和正常肝细胞株HL-7702中以及外源性USP3与MDM2在肝癌细胞株Hep G2中的相互作用情况。2、Western blot技术检测USP3去除MDM2分子上聚泛素化链的类型,以及USP3的两种失活突变体H56A和C168S对MDM2的去泛素化是否有影响。3、Western blot技术检测USP3是否能够稳定Hep G2细胞中MDM2的蛋白水平,以及USP3的两种失活突变体H56A和C168S对USP3稳定MDM2的能力是否有影响。4、Cell Counting Kit 8(CCK8)法检测USP3及USP3的两种失活突变体H56A和C168S对Hep G2细胞增殖的影响,以及加入MDM2抑制剂Nutlin-3后USP3及USP3的两种失活突变H56A和C168S对Hep G2细胞增殖的影响。结果:1、内源性和外源性USP3与MDM2在Hep G2细胞中均具有相互作用,但是内源性USP3与MDM2在HL-7702细胞中几乎没有相互作用。2、USP3能够通过去除MDM2蛋白分子上K48连接的聚泛素化链从而稳定MDM2蛋白,而USP3的两种失活突变体H56A和C168S则不具有此活性。3、USP3能提高Hep G2细胞的增殖而USP3的两种失活突变H56A和C168S不具有此活性,但是当MDM2的抑制剂Nutlin-3存在时USP3也失去提高Hep G2细胞增殖的能力。结论:1、MDM2是USP3的直接靶蛋白。2、USP3介导MDM2分子上K48连接的聚泛素化链的去泛素化以稳定MDM2蛋白。3、USP3通过MDM2促进Hep G2细胞的增殖。