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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)是导致人和动物肠道疾病的常见病原菌，通过产生肠毒素致病。肠毒素是在全球范围内引起食物中毒的重要原因之一，其中以金黄色葡萄球菌A型肠毒素(Staphylococcus aureus enterotoxinA，SEA)和产气荚膜梭菌肠毒素(Clostridium perfringe ns enterotoxin，CPE)较为常见。因此，建立一种敏感、快速的特异性检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素和产气荚膜梭菌肠毒素的方法，是进行食品安全检测，预防食物中毒的必要条件，具有重要的公共卫生意义。 本研究旨在制备高亲和力和特异性的SEA和CPE单克隆抗体和多克隆抗体，建立双抗夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA，DAS-ELISA)检测方法，并试用于实际样品检测。 1.成功构建了携带目的基因sea和cpe重组质粒pET-28a-sea和pET-28a-cpe，通过原核表达体系，获得了较高纯度的可溶性SEA以及CPE重组蛋白。 2.通过免疫小鼠、骨髓瘤细胞与脾细胞融合、ELISA筛选和克隆化，获得了针对SEA的单抗细胞株6株，分别命名为2C10、1G6、1F8、2A12、3D12和4C9，腹水纯化效果良好，效价均大于204800。亲和性分析表明，3D12的相对亲和力最高，亲和力常数为9.61×108L/mol，抗体亚类为IgG1。 3.分别以腹水型单克隆抗体作为捕获抗体，多克隆血清作为检测抗体建立针对SEA的DAS-ELISA方法，优化反应条件并建立标准曲线。结果表明:在SEA天然标准毒素浓度为2-128ng/mL范围内呈线性(y=1.102x-0.07，R2=0.994)，检测下限为1.89ng/mL;鲜奶中SEA人工污染试验测定回收率为90％-115％，变异系数小于10％;应用该方法对46株金葡菌水产品分离株和244株奶牛乳腺炎金葡菌分离株的体外培养上清进行检测，阳性率分别为4.4％和52.9％。 4.获得了针对CPE的单抗细胞株6株，分别命名为2F8、4C8、3G6、2E11、6F9和1D12，效价均大于100万。亲和性分析表明3G6的相对亲和力最高，亲和力常数为7.54×109L/mol。利用CPE腹水单抗作为捕获抗体，抗CPE兔多抗血清作为检测抗体建立了针对CPE的DAS-ELISA检测方法，在浓度范围2.44-625ng/mL之间呈现良好的线性关系(y=0.208x+0.001，R2=0.99)，最低检测限为2.19ng/mL。该方法对牛肉浸出液中CPE的加标回收率在90％-110％之间，批内与批间变异系数小于10％。