【摘 要】
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根肿病是由根肿菌(Plasmodiophora brassicae Wor.,Pb)造成的世界分布广泛专性寄生十字花科的土传病害,随着机械化水平的不断提高,逐渐成为困扰我国油菜生产的重大难题,解析根肿菌与植物互作的分子机制具有重大理论意义。病原菌分泌效应因子会破坏或干扰植物PTI或ETI免疫防卫途径的免疫反应,对病原菌的致病性有着至关重要的作用。研究根肿菌抗病基因与效应因子互作分子机制对解析植物抗
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根肿病是由根肿菌(Plasmodiophora brassicae Wor.,Pb)造成的世界分布广泛专性寄生十字花科的土传病害,随着机械化水平的不断提高,逐渐成为困扰我国油菜生产的重大难题,解析根肿菌与植物互作的分子机制具有重大理论意义。病原菌分泌效应因子会破坏或干扰植物PTI或ETI免疫防卫途径的免疫反应,对病原菌的致病性有着至关重要的作用。研究根肿菌抗病基因与效应因子互作分子机制对解析植物抗病分子机制以及抗病丧失分子机制具有重要意义。本研究以根肿菌分泌的效应因子为切入点,研究与植物互作的内源蛋白,获得如下结果:1.建立了室内根肿菌接种体系。建立并优化了稳定的室内接种体系,比较分析了不同地区根肿菌对同一抗性材料存在致病性差异,结果表明409R材料对四川地区具有免疫抗性,进一步对不同地区的根肿菌从分子层面进行解析,发现用效应因子作为标记进行归类是可行的。对分离的不同地区根肿菌效应因子PBRA6449、PBRA9214、PBRA6069、PBRA0619核苷酸序列分析发现同一效应因子存在的单碱基突变位点(SNP位点)。2.利用抗病基因筛选到10个候选根肿菌效应因子。本研究从根肿菌中成功分离了23个根肿菌效应因子,利用烟草叶片瞬时表达系统鉴定出3个根肿菌效应因子能单独使烟草叶片出现坏死,根肿菌效应因子与抗病基因CRa共表达筛选出10个能使烟草叶片出现坏死,对筛选到的10个候选根肿菌效应因子进行表达量分析,发现均在根组织中表达。3.以根肿菌效应因子为诱饵筛选到与油菜互作的23个内源蛋白。从候选的10个根肿菌效应因子在酵母细胞中进行转录活性检测,发现PBRA9124效应因子存在转录活性,PBRA6449效应因子有弱的转录活性,其余8个均无转录活性。进一步用根肿菌效应因子PBRA6449为诱饵蛋白,筛选与其互作的分子靶标,结果在QDO培养基中共长出192个单克隆,对其序列进行BLAST发现有23个蛋白编码完整的氨基酸片段,挑选出现次数较高的蛋白,进行点对点验证,发现均能互作。
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