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背景外泌体是一种纳米级别的生物膜结构,其中包含蛋白质、miRNA、细胞因子受体等多种生物活性物质,miRNA可在转录水平调节基因的表达,来调控细胞的增殖和凋亡,外泌体源性的miRNA目前发现具有生物学特性,参与很多疾病的生理病理过程,有望成为疾病的分子诊断标志物。外泌体中的miRNA-133是否可促进心肌分化迄今并未见报道。目的探讨心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)分泌的外泌体miRNA-133对成纤维细胞成心肌分化的作用。方法1.体外培养新生大鼠心脏成纤维细胞,利用免疫荧光技术和透射电镜技术对成纤维细胞及其外泌体进行鉴定。2.将培养的细胞分为3组:(1)诱导组(Control group,CONT);(2)miRNA-133高表达组(miRNA-133转染,miRNA-133 high expression group,miRNA-133H);(3)miRNA-133抑制组(miRNA-133抑制剂转染,miRNA-133 inhibitor group,miRNA-133I)。3.以慢病毒为载体,将miRNA-133转染CFs,miRNA-133inhibitor转染CFs,分别于转染后3d、8d、14d用Western Blotting、免疫荧光染色、real-time qPCR检测心肌细胞的标记物心肌肌钙蛋白(cardiac troponin T,cTnT)和心肌肌动蛋白(cardiac actin,α-actin)的表达,real-time qPCR检测成纤维细胞外泌体中miRNA-133的表达量。结果1.免疫荧光染色显示体外培养的CFs表达成纤维细胞的标记物vimentin和DDR2。2.CFs分泌的外泌体为30~100nm的小囊泡,外泌体囊泡表达外泌体特异性蛋白CD63和CD9。3.与诱导组相比,miRNA-133高表达组在不同时间段cTNT,α-actin和分泌到上清中的外泌体miRNA-133表达量逐渐升高,14d达到最高,miRNA-133抑制组最低。结论心肌成纤维细胞来源的外泌体miRNA-133能促进成纤维细胞成心肌分化。