高效液相色谱法目前已广泛应用于天然产物中生物活性化合物的分离。本文成功建立了啤酒花浸膏中有效成分的高效液相色谱分离纯化工艺,并对最终产物进行表征和定性验证。首先通过色谱条件优化建立了啤酒花浸膏的HPLC分析方法,6种有效成分(葎草酮、加葎草酮、合葎草酮、蛇麻酮、加蛇麻酮、合蛇麻酮)均达到基线分离,为进一步有效成分的放大制备和纯度检测奠定基础。其次依据高效液相制备色谱的线性放大理论及质量超载和体积超载等相关实验,确定了制备色谱条件：在室温下,采用HypersilC18 10μm色谱柱,流动相为V(乙醇)／V(0.2%冰乙酸水溶液)=65／35,流速15.0mL／min,进样量90mg,检测波长为UV315nm。在此制备条件下收集馏分,通过考察不同的后处理方法除去溶剂,最终确定最佳后处理方案为：先将馏分旋蒸浓缩,再经SPE萃取,之后氮吹,干燥得到黄色浸膏状产物。最后,采用分析型HPLC法对纯化的固体产物进行纯度检测,纯度高,均在90%以上；并通过UV、FT-IR和LC-MS鉴定其结构,验证确认了目标产品。本次制备方法工艺简单,生产出的产品纯度高,对进一步工业规模的HPLC分离制备具有一定的指导意义。