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目的:建立人白血病鸡胚转移模型,为研究白血病发展和转移机制,体外筛选抗白血病药物奠定基础。
方法:体外培养K562细胞,电穿孔转染绿色荧光蛋白表达质粒后,经药物筛选和单克隆化,获得稳定高表达绿色荧光蛋白的K562细胞,将表达GFP的白血病细胞经绒毛尿囊膜血管种植到12天龄的鸡胚里,孵育5~7天后观察K562细胞在鸡胚中的转移情况。用同样的方法,将鸡胚随机分为空白对照组、链激酶(SK)组、虎眼万年青皂甙(OSW-1)组、虎眼万年青皂甙和链激酶联合用药组,经绒毛尿囊膜血管向12天龄的鸡胚分别注射链激酶(2000U/鸡胚)+GFP+K562、虎眼万年青皂甙(10mg/kg)+GFP+K562、OSW-1+SK+GFP+K562后,继续孵育5~7天后,收集组织在荧光显微镜下观察药物抑制转移情况。
结果:电穿孔转染GFP表达质粒的K562细胞,经筛选,获得稳定高表达GFP的K562细胞。种植到鸡胚后,在其脑部、胸骨及心脏等部位可观察到绿色荧光,加用药物后收集组织在荧光显微镜下观察,发现SK和OSW-1均有抑制转移作用,联合用药的抗转移效果更好,其中SK最适用量为2000U/鸡胚,OSW-1最适用量为10mg/kg,提示抗白血病转移药物筛选模型建立成功。
结论:成功构建了表达绿色荧光蛋白的白血病鸡胚转移模型,发现鸡胚的脑部、胸骨、心脏等部位均可以发生白血病细胞转移和浸润,证实了白血病转移最频繁的部位是脑部,可发生心脏浸润。并验证了SK和OSW-1均有抑制白血病细胞转移作用,而SK和OSW-1联合用药抗转移效果更好。