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目的:本实验通过构建H22肝癌细胞小鼠皮下移植瘤模型,观察羟基喜树碱(HCPT)联合不同放疗剂量对H22肝癌细胞小鼠皮下移植瘤的抑瘤放疗增敏的效果。通过检测HIF-1α、VEGF蛋白的阳性表达水平,分析HCPT与细胞乏氧、抗血管生成作用的关系,从而初步探讨HCPT放疗增敏机制。 方法: 1. 随机数字法分为A:空白对照组(Control)、B:羟基喜树碱组(HCPT)、C:单纯放疗2 Gy组(Rt1)、D:单纯放疗4 Gy组(Rt2)、E:单纯放疗8 Gy组(Rt3)、F: HCPT+放疗2 Gy联合1组(HCPT+Rt1)、G:HCPT+放疗4 Gy联合2组(HCPT+Rt2)、H:HCPT+放疗8 Gy联合3组(HCPT+Rt3)共8组,每组10只,共80只(10只备用)。 2. 观察小鼠一般情况,每隔一日监测H22皮下移植瘤体积、计算各组肿瘤生长抑制率,绘制体积曲线及生长抑制率曲线;并计算增敏q值、增敏系数EF值。 3. 在治疗第14天时,每组随机处死4只,称重皮下瘤组织,计算肿瘤抑制率;光镜下观察HE染色后移植瘤细胞形态改变及坏死凋亡状况;免疫组化方法检测瘤组织中HIF-1α、VEGF阳性表达水平。 4. 动态观察每组剩的6只小鼠的生活质量、生存时间,计算生命延长率并绘图。 5. 采用SPSS21.0统计软件分析数据。采用One-way ANOVA方法对各个组的均数比较。采用LSD方法对组间多重比较。用Kaplan-Meier法分析各组小鼠生存数据。所有结果以P<0.05认为差异有统计学意义。 结果: 1. 3组HCPT联合放疗的小鼠相较于其他各组,毒副反应较轻,一般情况较好。其中,HCPT+放疗8 Gy小鼠生活质量最好,反应最灵活,摄水及觅食较好,生存时间最长。 2. 治疗第14天时,各个组皮下移植瘤体积差异明显(P<0.05);3组放疗联合HCPT组平均q值均>1,EF值均>1。其中,HCPT+放疗8 Gy组瘤块体积最小(2585.00±109.47) mm3、肿瘤生长抑制率(52.1%)和肿瘤抑制率(47.69%)最大、平均q值最大(2.02±0.61)、EF值最大(1.73)。 3. HE染色:各治疗组均出现不同程度的细胞凋亡面积变大、无结构红染区增多现象。以HCPT+放疗8 Gy组最显著。 4. HIF-1α、VEGF阳性表达:经放疗后3组放疗实验组中HIF-1α与VEGF表达均增高,以放疗8 Gy表达最明显。而HCPT组、HCPT+放疗的3个联合组HIF-1α与VEGF表达均降低,以HCPT+放疗8 Gy最为显著。 结论: 1. HCPT联合放疗可显著抑制H22肝癌移植瘤生长,有效提高小鼠一般生活状况、延长存活时间。且8 Gy放疗联用HCPT组抑瘤效果尤显著。 2. HCPT可增强H22肝癌细胞的放射敏感性,且在一定范围内以放疗8 Gy+HCPT组增敏效果最佳。 3. HCPT放疗增敏作用机制可能与降低HIF-1α、VEGF表达水平有关,可有效改善肿瘤乏氧状态、抑制血管增生从而提高放疗的疗效。