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[目的]微小RNA(microRNA, miRNA)是一类广泛存在的小分子非编码RNA,通过在转录后水平负调控靶基因的表达而参与多种生理和病理过程。越来越多的研究表明miRNA在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用。本实验室前期研究发现在肝癌细胞内沉默AFP后,细胞生长速度减慢,细胞周期停滞。microRNA-372(miR-372)表达水平的改变可能参与了AFP介导的细胞周期调控作用。在此基础上,本课题进一步探索miR-372在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌细胞生长表型的影响和对细胞周期的调控,并通过确定miR-372直接作用的靶基因,进一步阐明miR-372调控肿瘤细胞生长的可能的作用机制,从而为肿瘤发生发展的研究提供了更多的分子基础和治疗靶位。[方法]实时定量PCR确定miR-372在8对宫颈癌及癌旁正常组织标本中的表达水平。在人宫颈癌细胞系HeLa中过表达或者封闭miR-372,在实时定量PCR确定其表达变化的基础上,生长曲线计数检测miR-372对HeLa细胞生长的影响,流式细胞术(FACS)检测细胞周期的变化。随后,根据生物信息学分析,cDNA芯片结果结合基因的生物学功能筛选出miR-372的候选靶基因。通过半定量RT-PCR,实时定量PCR和western blot检测miR-372对靶基因mRNA和蛋白水平表达的影响。体外荧光报告载体系统进一步验证在HeLa细胞中miR-372是否可以直接结合靶基因的3’UTR从而调控靶基因的表达。[结果]与癌旁正常组织相比,miR-372在宫颈癌组织中呈现低表达。在HeLa细胞中过表达miR-372后,细胞生长速度减慢,封闭miR-372则加速了细胞的生长。流式细胞术检测发现miR-372表达升高后,细胞周期进程受到阻滞,S期比例增加,而G2期比例减少。反之,封闭miR-372后,S期阻滞得以释放而加快进入G2期。靶基因筛选得到CDK2, cyclin A1和PPP6C为miR-372的候选靶基因,其3’非翻译区均包含miR-372的潜在结合位点。高水平的miR-372可以下调靶基因mRNA水平和蛋白水平的表达,而封闭miR-372后,靶基因mRNA表达水平和蛋白表达水平均升高。荧光报告载体实验证实,miR-372能够通过作用于靶基因3’非翻译区的特定位点,对其表达在转录后进行负性调节。[结论]在HeLa细胞中,miR-372可以直接靶定细胞周期调控因子—CDK2, cyclin A1和PPP6C,通过改变它们的表达量来调控细胞周期的进程。正反两个方面结果都证实了miR-372可以延长细胞的S期,减慢细胞从S期向G2期过渡,进而导致HeLa细胞生长受到抑制。在宫颈癌组织中miR-372的表达水平低于癌旁正常组织,因此miR-372在宫颈癌中可能扮演着抑癌基因的角色。miR-372发挥基因调控的这一机制,增进了我们对miRNA功能与肿瘤相互关系的了解,为肿瘤发生发展的研究及诊断治疗提供了新的线索。