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研究目的:1.人胎盘来源的间充质干细胞(HPMSCs)已成为间充质干细胞的重要获得途径,并被证明与其他来源间充质干细胞相比有明显的优势。本实验尝试从胎盘中分离培养HPMSCs,并对其生物学特征进行鉴定;2.在无菌环境中制备装载VEGF/万古霉素的藻酸盐-壳聚糖多层缓释微球,并检测其对共培养的HPMSCs增殖活性及成骨活性有何影响。研究方法:1.将无菌条件下获取的人足月胎盘组织带回实验室,采用组织块贴壁法分离培养原代HPMSCs,MTT检测细胞生长曲线,对HPMSCs进行成骨及成脂诱导验证其多向分化潜能;2.按照前期实验确定的多层载药缓释微球的制备方法,选择试剂最优配比,探索无菌环境中多层载药缓释微球的制备;将制备好的微球与HPMSCs共同培养,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,茜素红染色及ALP试剂盒检测细胞成骨能力变化。研究结果:1.从人足月胎盘组织中分离培养的细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,生长曲线呈“S”形,成骨诱导后可见胞外钙盐沉积、茜素红染色阳性,成脂诱导后油红O染色阳性;2.经改良后制得的多层载药缓释微球大小均匀、表面光滑圆整,细菌学检测结果证明其符合无菌标准;3.共培养后的HPMSCs增殖能力无明显改变(P>0.05),成骨诱导后茜素红染色显示载药微球组钙盐沉积明显多于空载微球组及对照组,ALP试剂盒测试结果证实加入载药微球后细胞内碱性磷酸酶含量明显增高(P<0.05),空载组与无球组相比也有显著性差异(P<0.05)。研究结论:1.成功从人胎盘组织中分离培养出HPMSCs,对其生物学特征鉴定后证明其符合干细胞特性;2.成功制备出符合实验要求的载VEGF/万古霉素的海藻酸-壳聚糖多层载药缓释微球。3.通过多层载药缓释微球与HPMSCs共培养,成功证明其对HPMSCs增殖活性无明显影响,但能显著改善HPMSCs的成骨活性。