番茄THM27基因的克隆、表达载体的构建及遗传转化的研究

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植物MYB转录因子是一类调控类黄酮生物合成多种酶表达的转录调控因子,在转录水平上调控基因的表达,是植物对其生长发育及生理代谢调控的一种重要方式。以含有保守的MYB-结构域为共同特征,是最大的植物转录因子基因家族之一,广泛参与植物发育和代谢的调节。番茄是重要的蔬菜类作物,同时也是类黄酮的重要来源,为改良番茄的品质,提高番茄果实类黄酮含量,进行MYB转录因子的研究是非常必要的。THM27基因作为MYB转录因子的一种,具有MYB功能转录调控功能,能够调控类黄酮的生物合成。通过重叠PCR技术可以有效的在体外进行基因重组,并且不需要内切酶消化和连接酶的处理,操作简单,依靠此技术可以快速实现目的基因和启动子以及终止子的融合,改造表达载体。本研究以番茄为研究材料,通过巢氏PCR成功从番茄中克隆了MYB转录因子家族成员之一THM27基因;从番茄基因组DNA中克隆出番茄果实特异型启动子FQE2A11;并从pCAMBIA1302质粒中扩增出CMV35S启动子和NOS终止子序列。通过重叠PCR技术构建CMV35S启动子-THM27-NOS终止子组合元件,并将其构建到双元表达载体pCAMBIA1302上,将获得的重组质粒通过根癌农杆菌EHA105介导转入番茄子叶,建立番茄转THM27基因遗传转化体系,成功获得转基因番茄苗。为后期通过液相色谱研究MYB转录因子调控类黄酮合成之间关系打下坚实基础。
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