目的本研究基于中医藏象理论“肾精-脑髓”相关和气血相关理论及前期研究基础,以脑缺血神经干细胞增殖分化JAK/STAT信号调控通路及益气活血法、补肾生髓法干预为切入点,建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。借助基因芯片技术、蛋白质印迹法(Western Blot)、以及应用通路阻滞剂AG490进行阻滞,探讨两种治法(益气活血法、补肾生髓法)和AG490阻滞剂对脑缺血再灌注大鼠,缺血侧海马内源性NSCs增殖分化JAK/STAT信号通路基因及JAK2和STAT3蛋白表达的影响。探讨JAK/STAT信号通路在脑缺血大鼠NSCs增殖分化中的作用。为新安医家两种治疗方法的代表验方(益气活血方、补肾生髓方)的临床应用提供实验依据,丰富和发展神经再生理论。方法健康雄性SD大鼠80只,体重280~320g。随机分为假手术组,模型组,益气活血法组,AG490组,补肾生髓法组。用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞局灶性缺血再灌注模型,经神经缺损体征的评定,2~3分者入选,每组6只大鼠,3只做基因芯片用、3只做Western Blot检测用,干预组连续灌胃给药3天后取材。实验选用大鼠新鲜缺血侧海马组织,通过基因芯片技术检测大鼠缺血侧海马JAK/STAT信号通路调节因子基因的变化,通过蛋白质印迹法检测JAK2蛋白、STAT3蛋白表达的变化,基因芯片检测数据采用ΔΔCt方法统计,图像的灰度用Image J分析,目的蛋白的相对表达量等于各组因子的灰度值除以内参灰度值。得出的数据用SPSS17.0处理。各组均数的比较用单因素方差分析法,两两比较用LSD法,P<0.05表明有统计学意义。图表绘制用EXCEL2007。用Western Blot法所得的数据直接采用SPSS17.0进行统计分析。结果1实验一结果用基因芯片技术检测JAK/STAT信号通路中基因共89个。模型组与假手术组相比较,表达变化差异比较明显的基因有:A2m,Cxcl9,Fas,Fcgr1a,Il2ra,Lrg1,Prlr,Ptprc,Sirpa,Socs4,Socs5。其中基因表达上调的为:A2m,Fas,Fcgr1a,Lrg1,Ptprc,Socs4,Sirpa;下调基因为:Cxcl9,Il2ra,Prlr,Socs5。AG490阻滞剂组与模型组相比较,基因表达变化有明显差异的有:Fcgr1a,Prlr,Ptprc,Hprt1。其中基因表达上调的为:Prlr,Hprt1;下调基因为:Ptprc,Fcgr1a。益气活血法组与模型组相比较,基因表达变化差异比较明显的有:A2m,Crk,Cxcl9,Fas,Fcgr1a,Il2rg,Il6st,Irf1,Lrg1,Nfkb1,Nos2,Ptprc,Sirpa,Smad4,Socs4,Sp1,Stam,Stat5b,Tyk2,Hprt1。其中基因表达上调的为:Hprt1;其余基因表达均为下调。补肾生髓法组与模型组相比较,基因表达变化差异比较明显的有:Prlr,A2m,Cxcl9,Fas,Fcgr1a,Jak3,Lrg1,Nos2,Ptprc,Socs1,Socs4,Sp1。其中基因表达上调的为:Prlr;其余基因表达均为下调。2实验二结果用Western Blot检测JAK/STAT信号通路上JAK2蛋白和STAT3蛋白。结果:与假手术组比较,模型组JAK2蛋白和STAT3蛋白表达显著增加(P<0.01)。与模型组比较,AG组、益气活血法组和补肾生髓法组JAK2蛋白表达显著减少(P<0.01);AG组、益气活血法组和补肾生髓法组STAT3蛋白表达明显减少(P<0.05或P<0.01)。与益气活血法组比较,补肾生髓法组JAK2蛋白和STAT3蛋白表达无明显差异(P﹥0.05)。结论本实验发现分别用益气活血法和补肾生髓法及各自的代表方,可影响局部性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马JAK/STAT信号转导通路基因的表达,通过降低大鼠缺血侧海马蛋白JAK2和STAT3的表达,来调控JAK/STAT信号通路,进而影响局灶性脑缺血神经干细胞的增殖分化。