【摘 要】
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目的:本课题组前期实验证明,在裸鼠移植瘤模型内HMGA2可促进肾癌细胞EMT的发生,有促瘤作用。目前HMGA2在肾癌中的具体作用机制尚不明确。因此,本实验通过研究HMGA2对EMT、TGF-β/Smads信号通路和细胞凋亡相关分子的影响,来探讨HMGA2在人肾癌ACHN细胞中的作用机制。方法:1、通过RNA干扰技术（si RNA）转染人肾癌ACHN细胞,构建HMGA2低表达的细胞株。实验分为三组:
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目的:本课题组前期实验证明,在裸鼠移植瘤模型内HMGA2可促进肾癌细胞EMT的发生,有促瘤作用。目前HMGA2在肾癌中的具体作用机制尚不明确。因此,本实验通过研究HMGA2对EMT、TGF-β/Smads信号通路和细胞凋亡相关分子的影响,来探讨HMGA2在人肾癌ACHN细胞中的作用机制。方法:1、通过RNA干扰技术（si RNA）转染人肾癌ACHN细胞,构建HMGA2低表达的细胞株。实验分为三组:Control组（空白组）、si RNA-NC（阴性对照组）、si-HMGA2（si-HMGA2-1、si-HMGA2-2、si-HMGA2-3;实验组）。2、通过q RT-PCR和Western blot,在m RNA和蛋白水平检测EMT中E-cadherin、N-cadherin、Snail的表达量。3、通过q RT-PCR和Western blot,在m RNA和蛋白水平检测TGF-β/Smads信号通路中TGF-βR II、Smad-2、Smad-3、Snail的表达量。4、通过q RT-PCR和Western blot,在m RNA和蛋白水平检测细胞凋亡相关分子Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的表达量。结果:1、在q RT-PCR和Western blot实验中,si-HMGA2的三组细胞HMGA2 m RNA和蛋白表达量明显低于Control组和si RNA-NC组,差异有统计学意义（P＜0.001）。2、在q RT-PCR和Western blot实验中,与Control组、NC组相比,si-HMGA2组的E-cadherin m RNA和蛋白表达量明显升高,N-cadherin、Snail的表达量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。3、在q RT-PCR和Western blot实验中,与Control组、NC组相比,si-HMGA2组的TGF-βR II、Smad-2、Smad-3、Snail m RNA和蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。4、在q RT-PCR和Western blot实验中,与Control组、NC组相比,si-HMGA2组的Bcl-2 m RNA和蛋白表达量明显降低,Caspase-3、Caspase-9的表达量明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1、si RNA转染技术有效,能够成功构建HMGA2低表达的人肾癌ACHN细胞,并且si-HMGA2-2细胞的转染效果最佳。2、HMGA2对肾癌细胞的作用机制与EMT有关,是通过影响EMT标志蛋白E-cadherin和N-cadherin来实现的。3、HMGA2发挥生物学功能的机制与TGF-β信号通路有关,在TGF-β信号通路中,HMGA2能够与激活的Smad-2、Smad-3相互结合并形成复合物,诱导靶基因Snail的表达,促进Snail蛋白的生成,诱发肾癌细胞EMT,从而促进肾癌细胞的发生、发展及转移。4、HMGA2通过Bcl-2/Caspase-3/Caspase-9信号通路影响细胞凋亡。低表达的HMGA2使得ACHN细胞中的Bcl-2表达下降,并激活其下游基因Caspase-3、Caspase-9,启动Caspase级联反应,而两者负相关的表达更加速了肾癌细胞的凋亡。
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