hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:tian_mizhen
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目的探讨人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophicfactor,hBDNF)基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)移植入大鼠体内后在脊髓损伤区的存活情况、hBDNF蛋白的表达情况及其对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法240只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为hBDNF-rMSCs组,空载体-rMSCs组,损伤组,假手术组,每组60只。采用Allen法建立大鼠T9-11脊髓损伤模型。造模后7d,于L4-5间隙蛛网膜下腔向hBDNF-rMSCs组、空载体-rMSCs组和损伤组分别注射等体积的hBDNF基因修饰rMSCs悬液、空载体基因修饰rMSCs悬液和磷酸盐缓冲液(PBS)。移植后1,2,3,7,14d分别取损伤脊髓组织,用荧光显微镜观察带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescentprotein,EGFP)基因的rMSCs在体内的存活分布情况,用Western Blot法检测hBDNF蛋白的表达水平,以原位末端标记法(TUNEL)结合HE染色观察神经细胞的凋亡情况。结果(1)荧光显微镜观察结果:hBDNF-rMSCs组和空载体-rMSCs组大鼠脊髓损伤节段均检测到带有EGFP基因的rMSCs细胞表达的绿色荧光信号,其余各组各时间点均未检测到绿色荧光信号。(2)Western Blot结果:hBDNF-rMSCs组检测到hBDNF蛋白表达,其表达水平随时间而变化,移植后2d开始表达,7d表达量最高,此后逐渐下降;其余各组各时间点均未见hBDNF蛋白的表达。(3)HE染色结果: hBDNF-rMSCs组损伤区内组织结构较损伤组和空载体-rMSCs组完整,存活神经元数量多于损伤组和空载体-rMSCs组,灰白质结构破坏程度及空腔形成亦轻于损伤组和空载体-rMSCs组。(4)Tunel法检测结果移植后2,3,7,14d,hBDNF-rMSCs组TUNEL阳性细胞数量最少,空载体-rMSCs组次之,损伤组较多,差异有统计学意义(P<0.05)结论脊髓损伤后hBDNF基因修饰rMSCs经蛛网膜下腔移植能聚集生长在脊髓损伤区域,并表达hBDNF蛋白;hBDNF基因修饰rMSCs能够抑制神经细胞的凋亡。
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