rLj-RGD3蛋白对人卵巢癌SKOV3细胞及其移植瘤的抑制作用及作用机制研究

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rLj-RGD3(recombinant Lj-RGD3,rLj-RGD3)是一种分子量为13.5 k Da、含有三个RGD模体的、源于日本七鳃鳗口腔腺的基因重组蛋白。前期研究证明,rLj-RGD3具有广谱靶向抗肿瘤和抗血管新生功能。不过,rLj-RGD3对卵巢癌SKOV3细胞的相关作用和机制却鲜有研究和报道。为了研究rLj-RGD3对卵巢癌SKOV3细胞的药理药效作用,本论文对rLj-RGD3是否能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、是否能够抑制裸鼠卵巢癌移植瘤生长及其功能所涉及的作用机制进行了研究。由于rLj-RGD3富含组氨酸,因此本研究采用了亲和层析的方式获得了大量电泳纯度的rLj-RGD3。这为rLj-RGD3的进一步应用奠定了基础。细胞增殖实验结果表明,rLj-RGD3可呈剂量依赖性的方式显著抑制SKOV3细胞的增殖,其IC50值为9.7μM。为了研究rLj-RGD3是否可以诱导SKOV3细胞发生凋亡,本论文采用了TUNEL、Hoechst33258染色、流式(Annexin V/PI双染)以及Western Blot等方法证实了rLj-RGD3能够通过线粒体凋亡通路、死亡受体凋亡通路以及MAPK信号通路等多个信号通路来诱导SKOV3细胞发生凋亡。此外,划痕实验、Transwell、鬼笔环肽荧光标记以及western blot实验结果表明,rLj-RGD3能够通过破坏SKOV3细胞骨架、抑制其伪足形成以及改变黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达水平及磷酸化水平来抑制由碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)诱导的SKOV3细胞的迁移与浸润,且这种抑制作用呈剂量依赖性。在上述体外实验基础上,本课题研究还建立了SKOV3卵巢癌移植瘤裸鼠动物模型,并确定了rLj-RGD3毒素蛋白在不影响裸鼠体重的前提下可以有效的抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生长。综上,rLj-RGD3在体内、体外都具有抑制卵巢癌SKOV3细胞活性的功能,具有成为抗肿瘤候选药物的潜在应用价值。
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