牛病毒性腹泻-粘膜病（BVD-MD）,是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种发热、粘膜糜烂、溃疡、腹泻、白细胞减少、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的传染病。由于其能引起母牛繁殖系统障碍并能形成持续性感染,因而对养牛业有着重要的影响。本试验用MDBK细胞增殖BVDVOregon C₂₄V,在细胞出现80%病变时,收获细胞病毒培养液。对标准毒株Oregon C₂₄V进行TCID₅₀的测定,测得TCID₅₀为105.52。依据GenBank中已发表的Oregon C₂₄V （AF091605）,NADL （M3118）,ZM95（AF526381）, Singer （DQ088995）等13株BVDV全基因序列进行比对,使用Primer 5.0软件设计一对扩增引物,在扩增标准毒株Oregon C₂₄V得到了大小为330 bp的片段,与预期设想一致。对CSFV, IBRV,BRV, PRV, PRRSV, MDBK细胞进行RT-PCR扩增,都未扩增出片段,表明此方法具有较高的特异性。对BVDV的TCID₅₀倍比稀释后进行检测,稀释106倍仍能检测到病毒,表明此方法具有较高的敏感性。对临床采集的70份犊牛腹泻的粪便样品进行检测,有17份检测为阳性,阳性率为24.28%。表明此方法可用于BVDV实验室检测。以上结果证明该方法具有较高的实用价值,可为BVDV的实验室快速诊断提供一个有效的方法。本试验依据GenBank中已发表的BVDV全基因序列进行比对,使用Primer 5.0软件针对gP48全基因设计一对扩增引物,应用RT-PCR扩增技术对BVDVC₂₄V株进行扩增并进行克隆及酶切鉴定,构建了pMD18-T-gP48载体。将克隆载体进行测序,经序列对比与发表序列一致,表明成功构建了pMD18-T-gP48载体。试验将gP48基因插入到pET32a（+）质粒,构建了原核表达载体。将构建好的原核表达载体进行酶切鉴定。SDS-PAGE进行检测分析,在46kDa左右处有蛋白条带。将表达蛋白纯化后进行Western-Blotting分析,在46kDa左右处有特异性免疫印迹条带。结果表明gP48基因蛋白在原核表达载体中得到表达,而且能被BVDV阳性血清所识别。证明成功构建了PET32a（+）原核表达载体,为进一步建立检测BVDV的ELISA方法奠定基础。