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第一章7日龄SD大鼠HIE模型的建立及评价目的:建立一种标准的HIE大鼠模型,为下一步EPO联合亚低温对HIE大鼠神经保护作用及机制研究奠定理论基础。方法:借鉴国内外经验,以7日龄SD大鼠为研究对象,通过行左侧颈总动脉双线结扎并离断后置于自制常压缺氧箱中,通入含8%O2+92%N2混合气体创造缺氧环境,持续2.5 h,制作HIE模型,采用Longa 5分法、鼠大脑外观、体质量变化测定、脑含水量测定、左右脑半球质量比较、组织病理学（HE染色、Nissl染色、TTC染色、透射电镜、TUNEL染色）检测、行为学实验（抓力、转棒、水迷宫实验）等方法以鉴定模型是否成功。结果:本实验中,7日龄SD大鼠建模后出现全身青紫或发黑、反应迟缓、身体左旋、运动障碍等症状符合临床上新生儿中重度HIE表现;模型组72 h可出现左脑萎缩,体重增长速度明显低于对照组,左脑含水量与对照组左脑含水量相比显著升高,左脑半球质量小于对照组;HE染色显示左侧脑组织皮层细胞水肿,神经元出现不规则排列;Nissl染色显示神经细胞水肿、变性甚至坏死,Nissl小体形态模糊或消失;TUNEL染色显示脑组织可见大量凋亡小体,呈棕黄色;电镜结果提示模型组大鼠海马CA1区细胞体积大,数量减少,胞浆内有空泡形成,粗面内质网减少,CA3区核糖体多,线粒体增多,粗面内质网减少。行为学实验结果提示模型组右前肢肌力减小,协调运动能力下降,学习记忆能力减退。结论:我们成功建立HIE模型,可用于中重度HIE实验研究,为下一步研究奠定基础。第二章EPO联合亚低温治疗对HIE模型神经保护作用及机制研究目的:研究EPO联合亚低温治疗对HIE模型神经保护作用及机制方法:采用TUNEL染色法对各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况进行检测,免疫组化法检测脑组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达以及Western blotting检测Jak2、NFκB、Bax、Bcl-2、cyt C表达,行为学实验观察前肢肌力、协调运动能力及空间学习记忆能力。结果:抓力测试结果提示,EPO治疗、亚低温治疗对HIE鼠右前肢肌力有改善作用（P<0.05）,EPO联合亚低温治疗对大鼠右前肢肌力有显著改善作用（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗对大鼠右前肢肌力的改善程度没有统计学意义（P>0.05）。转棒测试结果显示,EPO治疗组、亚低温治疗对大鼠协调运动能力有改善作用（P<0.05）,EPO联合亚低温治疗对大鼠协调运动能力有显著改善作用（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗在改善大鼠协调运动能力程度上无差异（P>0.05）。水迷宫实验结果提示,EPO治疗组、亚低温治疗对大鼠学习记忆能力有改善作用（P<0.05）,EPO联合亚低温治疗对大鼠学习记忆能力有显著改善作用（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗在改善大鼠学习记忆能力程度上无明显差异（P>0.05）。TUNEL染色结果表明,HIE组脑组织神经凋亡细胞数量大于假手术组（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组脑组织神经凋亡细胞数量小于HIE组（P<0.05）,EPO联合亚低温治疗组脑组织神经凋亡细胞数量显著小于HIE组（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗组脑组织神经凋亡细胞数量组间比较无明显差异（P>0.05）。免疫组化结果显示,HIE组脑组织促凋亡蛋白Bax表达显著高于假手术组（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组脑组织促凋亡蛋白Bax表达少于HIE组（P<0.05）,EPO联合亚低温治疗组脑组织促凋亡蛋白Bax表达显著少于HIE组（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗组脑组织促凋亡蛋白Bax表达量无明显差异（P>0.05）。HIE组脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著少于假手术组（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达多于HIE组（P<0.05）,EPO联合亚低温治疗组脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著多于HIE组（P<0.01）。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗组脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达量无明显差异（P>0.05）。WB结果提示,HIE组大鼠脑组织Jak2、NFκB、Bax、cyt C蛋白的表达量显著大于假手术组（P<0.01）。EPO治疗组（P<0.05）、亚低温治疗组（P<0.05）、EPO联合亚低温治疗组（P<0.01）脑组织Jak2、NFκB、Bax、cyt C表达量小于HIE组。HIE组Bcl-2蛋白表达量小于假手术组（P<0.01）。EPO治疗组（P<0.05）、亚低温治疗组（P<0.05）、EPO联合亚低温治疗组（P<0.01）脑组织Bcl-2蛋白表达量大于HIE组。EPO治疗组、亚低温治疗组、EPO联合亚低温治疗组脑组织Jak2、NFκB、Bax、cyt C蛋白表达量无明显差异（P>0.05）。结论:1.EPO联合亚低温治疗能够显著改善HIE大鼠右前肢肌力、协调运动能力和学习记忆能力。2.EPO联合亚低温治疗显著减少了神经细胞凋亡,表明EPO联合亚低温对HIE大鼠神经细胞有保护作用。3.EPO治疗、亚低温治疗、EPO联合亚低温治疗在改善HIE大鼠右前肢肌力、协调运动能力和学习记忆能力、抑制神经细胞凋亡、调节脑组织Jak2、NFκB、Bax、Bcl-2、cyt C蛋白表达上无显著差异。4.EPO联合亚低温对HIE的神经保护作用可能与抑制细胞凋亡有关,该作用可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Jak2、NFκB、Bax、cyt C蛋白表达有关。目的:通过体内实验探讨α-细辛醚对癫痫大鼠脑组织内小胶质细胞介导的免疫炎症反应的作用,体外实验研究α-细辛醚对脂多糖（LPS）介导大鼠小胶质细胞免疫炎症反应的影响,从而明确α-细辛醚的抗癫痫作用及其抑制免疫炎症反应的关键环节及其作用靶点。方法:建立大鼠Li-Pilocarpine癫痫模型,随机分为正常对照组,模型组以及α-细辛醚干预组,免疫组化法观察各组大鼠脑组织内小胶质细胞活化情况,EMSA检测脑组织内NFκB活化、入核,Westernblotting检测i NOS和COX-2表达。原代培养大鼠小胶质细胞,LPS诱导其活化,随机分为正常对照组、模型组和不同浓度α-细辛醚干预组,免疫荧光观察小胶质细胞形态学变化,EMSA检测各组细胞NFκB活化入核情况,Western-blotting法检测各组细胞i NOS和COX-2表达。并应用HPLC-MS/MS方法测定腹腔给予100 mg/kgα-细辛醚后其在大鼠脑组织中的浓度曲线。结果:与对照组比较,癫痫大鼠脑内NFκB活化入核增多,α-细辛醚干预组大鼠脑内NFκB活化入核减弱（P<0.05）。与正常对照组比较,模型组小胶质细胞活化数目增多,胞内NFκB活化入核增加（P<0.05）。与模型组比较,不同浓度的α-细辛醚均可抑制小胶质细胞活化,并对胞内NFκB活化入核,i NOS和COX-2表达均有抑制作用（P<0.05）,其作用呈剂量依赖性,100μg/m Lα-细辛醚作用最明显。HPLC-MS/MS结果表明体内给予100 mg/kgα-细辛醚在体外剂量范围内（0.4,4,8,16,32,和64μg/ml）。结论:1.α-细辛醚可从体内及体外两方面抑制NFκB活化入核,呈剂量依赖性,以100μg/m Lα-细辛醚作用最明显。2.本研究揭示了α-细辛醚可能通过抑制NFκB活化入核发挥抗炎抗癫痫作用,为α-细辛醚抗癫痫的临床应用提供了理论基础,并为研发抗癫痫药物及有效治疗癫痫提供了新思路。