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背景和目的儿茶酚胺加速多种肿瘤体外扩增,相反,抑制肾上腺素能受体则抑制肿瘤细胞生长。这在一定程度上解释了应激过度和肿瘤发生、转移之间的相关性。儿茶酚胺是否影响多发性骨髓瘤目前尚无系统报道。本文主要研究肾上腺素受体信号系统对骨髓瘤细胞、骨髓瘤骨髓基质细胞(MM-MSC)的影响,并初步探讨阻断β肾上腺素能受体对骨髓瘤细胞增殖的作用及机理。材料和方法：体外培养人骨髓瘤细胞系U266、RPMI8226,反转录PCR测定瘤细胞儿茶酚胺关键酶(酪氨酸羟化酶TH、多巴胺羟化酶DβH) mRNA的表达。在以下三种条件下应用MTS方法分别测定骨髓瘤细胞系及对照组淋巴母细胞NCI-BL2009的增殖变化：(1)加入给予不同浓度的肾上腺素处理,(2)同时加入抗肿瘤作用的硼替佐米和肾上腺素,(3)分别加入α受体激动剂及阻断剂、β受体激动剂及阻断剂,判断肾上腺素对肿瘤细胞的作用是通过何种受体亚型实现。进一步研究影响细胞增殖的β受体亚型：应用反转录PCR鉴定两种细胞系表达β肾上腺素能受体亚型β1、β2、β3的mRNA水平,比较其表达量差异,并分别应用β1、β2受体激动剂刺激瘤细胞后MTS检测细胞增殖变化。进而对β肾上腺素受体通路影响肿瘤细胞增殖的机制进行初步探索：(1)肾上腺素及β受体激动剂刺激后应用ELISA方法检测骨髓瘤细胞分泌VEGF变化；(2)研究广谱β受体阻断剂普萘洛尔对肿瘤瘤细胞及对照组淋巴母细胞细胞增殖的影响。MTS法检测0-400umol/1普萘洛尔作用24、48后细胞增殖变化,台盼兰对活细胞染色计数的方法检测低浓度普萘洛尔(0-50umol/1)长期作用于骨髓瘤细胞后(16d)活细胞数的变化。采用DAPI染核、Annexin V-PI双染法评估细胞凋亡,同时采用Caspase3/7、8、9-Glo-assay检测瘤细胞凋亡蛋白的表达,采用westernblot免疫印迹方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。第三部分测定肾上腺素,β受体阻断剂普萘洛尔对原代骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞(MM-MSC)的作用。取多发性骨髓瘤患者抗凝骨髓,CD138免疫磁珠分选纯化骨髓瘤细胞,同时分选MM-MSC。对原代骨髓瘤细胞及BMSC给予不同浓度的肾上腺素、普萘洛尔处理,应用二乙酸荧光素(FDA)染料染色检测原代细胞活力变化,应用MTS方法检测MM-MSC细胞增殖变化。结果：骨髓瘤细胞系RPMI8226表达合成儿茶酚胺的关键酶TH、Dβ H mRNA。肾上腺素(>5umol/1,24h)刺激骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226增殖(P<0.05),且成剂量依赖效应,最大浓度50μmol/L作用后增殖比例达到415%±34%、408%±34%(p<0.05)。肾上腺素可以抵消体外硼替佐米的抑制骨髓瘤细胞作用。肾上腺素的促增殖效果涉及α、β受体激活。此两种细胞系表达β2、β3受体的mRNA受体。广谱β受体阻滞剂普萘洛尔可以有效抑制骨髓瘤细胞株U266.RPMI8226增殖(>50umol/1,24/48h),且成剂量时间依赖效应,48h最大浓度400uM时细胞增殖活力下降至29.2%±4.6%、18.3%±2.0%(p<0.05)。低浓度普萘洛尔(10umol/1-50umol/1)长期处理此两种骨髓瘤细胞系(16d)可以抑制其增殖,台盼兰染色活细胞比例分别下降29.4%±2.3%-95.2%±1.7%(U266细胞,10umol/1-50umol/1,p<0.05).84.4%±2.5%-93.0%±5.2%(RPMI8226细胞,20umol/1-50umol/1p<0.05).普萘洛尔(200umol/1)作用后RPMI8226骨髓瘤细胞出现核碎裂比例增高。普萘洛尔(50-200umol/1)可以诱导U266.RPMI8226. MM.1S三种骨髓瘤细胞株晚期凋亡(Annexin V-PI双阳性)比例升高。普萘洛尔可以促进U266.RPMI8226Caspase3/7.8.9的表达增高,200umol/1作用U266细胞6h caspase3/7.8.9发光强度分别增加26743±7113RLU.7978±1805RLU.27705±2335RLU(p<0.05);作用RPMI8226细胞6h caspase3/7、8、9发光强度分别增加21751±3760RLU.12070±1317RLU.53627±6882RLU(p<0.05). Westernblot检测显示50-100umol/1普萘洛尔可以促进U266细胞促凋亡蛋白Bax表达升高,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调。肾上腺素及β受体激动剂并不促进肿瘤细胞VEGF的分泌增加。肾上腺素(100umol/1)可以促进MM-MSC的增殖,细胞增值活力变化为：235%±85.5%(p<0.05),普萘洛尔(200umol／1)可以抑制MM-MSC增殖活力,细胞增值活力变化为：76.3%±11.2%(p<0.05)。普萘洛尔可以抑制原代CD138+细胞细胞活力,FDA阳性率下降幅度为71.4%±30.5%(p<0.05)。结论：骨髓瘤细胞具有合成儿茶酚胺的关键酶,可能自合成、分泌儿茶酚胺类物质。肾上腺素能受体激活体外促进骨髓瘤细胞及BMSC的增殖,长期应激状态可能促进骨髓瘤细胞生长,对硼替佐米治疗反应不利。肾上腺素受体a、β均参与促进骨髓瘤细胞作用,β受体亚型中β2、β3mRNA表达强度高于β1,广谱β受体阻滞剂普萘洛尔体外可诱导骨髓瘤细胞凋亡,是一种潜在的抗骨髓瘤药物。