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本研究以碗莲茎尖为外植体,探讨了不同生长调节物质在茎尖的诱导、增殖以及诱导生根过程中的作用,分析不同培养过程中主要影响因子及其有效浓度范围;同时以碗莲幼嫩叶片、藕节、叶柄基部为外植体,探讨其愈伤组织的诱导,意为碗莲的快速繁殖提供参考。
实验结果如下:
1)采用0.10%升汞和75%酒精为消毒剂对外植体进行处理时,茎尖的适宜消毒时间在10min左右。
2)茎尖最佳取材时间为10月份至12月份。
3)启动培养适宜的培养基为:1.00mg·L-1 6-BA+0.25mg·L-1NAA+1.00mg·L-1GA3,启动率可达83.22%,主要影响因素是赤霉素NAA和GA3。
4)固液培养状态:上层为5mm厚的MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.25mg·L-1NAA+1.0mg·L-1GA3液态培养基,下层为1cm厚的MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.25mg·L-1NAA+1.0mg·L-1GA3固态培养基,更有利于茎尖诱导。
5)增殖培养适宜的培养基为MS+2.0 mg·L-1 6-BA+0.25mg·L-1NAA。增殖系数最高为3.3,且芽苗叶柄较长,叶色浓绿,叶片伸展较多。
6)四种碳源对增殖影响的大小排序为:葡萄糖>蔗糖>果糖>麦芽糖。葡萄糖效果最好。
7)碗莲的继代时间以40d为宜。
8)生根的适宜培养基为:MS+1.00mg·L-1 IBA,平均根数为11.68个,平均根长为42.00mm.。
9)培养过程中污染的芽苗用75%酒精1min、0.1%HgCl2 10min灭菌效果最好。