对人类mRNA加工因子CPSF30与Fip1复合物的溶液结构的研究

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mRNA 3’末端加工包括mRNA前体pre-mRNA 3’末端的切割和多聚腺苷酸化两个过程,CPSF复合物(cleavage and polyadenylation specificity factor)主要负责mRNA前体切割和多聚腺苷酸化位点PAS(poly(A)site)的识别。CPSF对PAS位点的正确识别是3’末端加工中至关重要的一步。迄今为止,虽然CPSF的核心复合物与PAS RNA结合的结构已经得到解析,但是对于CPSF复合物如何调控识别PAS信号的分子机制还不十分清楚。其中,对于CPSF亚基Fip1和CPSF30的C末端的锌指结构域如何调控PAS RNA的识别还有待发现。尤其是Fip1蛋白,只有酵母中的Fip1蛋白N端一段约25个氨基酸的小肽与poly A聚合酶Pap1复合体的结构得到解析,而对于中心区域~7KDa的在真核生物中高度保守的序列,还有C端的与CFIm(cleavage factor Im)和RNA结合部分的构象都还未知。本论文研究分别在体外表达纯化了Fip1蛋白和CPSF30的C末端连续锌指结构域ZF4-ZF5蛋白,并得到了二者稳定的复合物。并运用液体核磁共振(solution NMR)方法在研究柔性大分子方面的优势,初步鉴定了在复合物中Fip1中心保守结构域的二级结构特征。通过NMR滴定实验探讨了复合物与PAS RNA的结合,得到了复合物与RNA结合的关键区域信息。基于以上实验结果,我们推测Fip1与CPSF30复合物可能通过抑制CPSF对PAS RNA的结合来调控CPSF蛋白机器对多聚腺苷酸化位点的识别过程,为对真核mRNA多腺苷酸化过程中CPSF复合物的分子机制研究奠定了基础。
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