HSYA对冠状动脉内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

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目的:本研究的目的是检测并探讨谷红注射液及其有效活性成分羟基红花黄色素A(HSYA)对过氧化氢(H2O2)及高氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)损伤的保护作用。方法:本研究通过用高ox-LDL诱导处理HCAEC来模拟动脉粥样硬化的过程。首先,用甲基四唑蓝(MTT)比色法检测了不同浓度的的谷红注射液、H2O2、ox-LDL、HSYA、高ox-LDL对HCAEC细胞活力的影响,确定了各自的最佳工作液浓度并建立了细胞损伤模型。接下来本研究分别采用硝酸盐还原法和乳酸脱氢酶比色法检测了用高ox-LDL及HSYA处理细胞后细胞培养液中一氧化氮(NO)和乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。其次,用TUNEL(TdT介导的DUTP Nick-End Labeling)方法观察不同处理组细胞凋亡情况。最后,通过蛋白质印迹法(Western-Blot,WB)及实时逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测不同处理组凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白和mRNA的表达。结果:与对照组相比,不同浓度H2O2作用于HCAEC,细胞存活率随H2O2浓度的增加而降低,谷红注射液干预后细胞存活率升高,差异具有统计学意义,P<0.05,n=15。和对照组相比,随着ox-LDL及高ox-LDL浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,而用谷红注射液或HSYA共处理后,细胞存活率明显上升,差异具有统计学意义,P<0.01,n=15。与对照组相比,高ox-LDL组胞质NO含量降低,LDH释放量显著增加;与高ox-LDL组相比,高ox-LDL+HSYA组的NO释放增加,LDH释放量降低,差异均具有统计学意义,P<0.01,n=9。TUNEL技术显示高ox-LDL组凋亡细胞的数量显著增加,高ox-LDL+HSYA组细胞凋亡数量明显降低,细胞凋亡率由46.16%降至31.88%,差异具有统计学意义,P<0.01,n=6。与对照组相比,高ox-LDL组eNOS蛋白表达降低,LOX-1蛋白表达上调。同时,与高ox-LDL组相比,高ox-LDL+HSYA组eNOS蛋白表达上调,LOX-1蛋白表达水平下调,差异均具有统计学意义,P<0.01,n=3。与对照组相比,高ox-LDL组eNOS mRNA表达降低,LOX-1 mRNA表达上调。同时,与高ox-LDL组相比,高ox-LDL+HSYA组eNOS mRNA表达上调,LOX-1 mRNA表达水平下调,差异均具有统计学意义,P<0.01,n=9。结论:谷红注射液能抑制H2O2及高ox-LDL诱导的HCAEC损伤,谷红注射液有效活性成分HSYA能显著抑制高ox-LDL诱导的HCAEC损伤并促进HCAEC修复,HSYA的这种保护作用可能是通过上调eNOS基因和蛋白表达,增加NO释放;同时下调LOX-1 mRNA和蛋白表达和抑制LDH释放来实现的。
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