【摘 要】
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热带水果菠萝(Ananas comosus)的开花时间和花序形态会影响结实时间和果实品质,对果农的经济收益产生影响。随着菠萝转录组测序成功和分子生物技术的迅猛发展,菠萝SPL(Squamosa promoter binding-like protein)家族的全基因组鉴定已经完成,但是SPLs基因功能及其具体调控机制尚不清楚,本文对菠萝AcSPL3(Ananas comosus squamosa
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热带水果菠萝(Ananas comosus)的开花时间和花序形态会影响结实时间和果实品质,对果农的经济收益产生影响。随着菠萝转录组测序成功和分子生物技术的迅猛发展,菠萝SPL(Squamosa promoter binding-like protein)家族的全基因组鉴定已经完成,但是SPLs基因功能及其具体调控机制尚不清楚,本文对菠萝AcSPL3(Ananas comosus squamosa promoter binding-like protein 3)基因进行特征描述和功能分析,来探究AcSPL3基因在菠萝的生长发育过程中所扮演的角色,为菠萝品种选育和改良提供分子理论依据。实验室前期已经通过菠萝转录组测序筛选到可能与开花和花序发育相关的基因AcSPL3,本研究成功克隆得到目的基因AcSPL3,借助生物信息学和实时荧光定量技术对AcSPL3进行序列和表达特性分析,并把AcSPL3在拟南芥和同属凤梨属的蜻蜓凤梨(Aechmea fasciata)中过表达,进行功能分析。主要研究结果如下:1、在“台农11号”菠萝中成功分离到目的基因AcSPL3,顺利构建35S::AcSPL3过表达载体。2、生物信息学分析表明AcSPL3基因的3’-UTR(3’-untranslated region)存在miRNA156(Micro RNA156)结合序列,AcSPL3蛋白的N端由酸性氨基酸组成。AcSPL3蛋白中含有由一个核定位信号和两个锌指结构组成的SBP结构域且其末端含有碱性氨基酸,表明了SBP的结构在不同物种之间也是相对保守的。系统进化树分析显示AcSPL3和Os SPL13在同一进化分支上,说明菠萝AcSPL3相较于模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana),可能与单子叶植物水稻(Oryza sativa)的SPLs基因在功能上存在相似性。AcSPL3基因启动子含有激素和胁迫响应元件,猜测AcSPL3可能参与菠萝激素调控途径和抗逆胁迫。3、菠萝AcSPL3的表达特性分析显示AcSPL3在菠萝幼株期、成株期、开花期的不同组织部位中均表达。AcSPL3基因在幼株期、成株期、开花期相对表达量最高的组织部位依次为为茎、心叶、萼片,并且成株中除茎和根外AcSPL3表达量都显著高于幼株,表明AcSPL3基因可能参与菠萝茎、叶片和花器官的发育,而且很可能是通过参与年龄途径调控菠萝的生长发育。菠萝组培苗在脱落酸的处理下AcSPL3基因相对表达量从时间变化来看呈现先下降后上升再下降的趋势,在茉莉酸甲酯处理下AcSPL3基因相对表达量呈现先下降后上升的趋势,在赤霉素处理下AcSPL3基因相对表达量变化非常明显,总体呈上升趋势,AcSPL3基因在乙烯处理下呈现先升高再降低再升高直至表达量趋于原先未处理的正常表达水平。不同激素处理下AcSPL3基因的相对表达量的变化表明AcSPL3可能通过激素参与相关开花调控和花的发育。4、通过农杆菌侵染进行拟南芥和蜻蜓凤梨的遗传转化实验,筛选到了35S::AcSPL3转基因拟南芥和蜻蜓凤梨阳性植株,转基因拟南芥有多个花序且出现种子籽粒不饱满现象,转基因蜻蜓凤梨还未见明显表型变化。本研究为深入探究菠萝AcSPL3基因的表达及调控模式奠定了分子基础,并且为菠萝乙烯催花和菠萝开花机理提供参考依据。
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