目 的:1、基于质量源于设计(QbD)理念,从源头设计丹七粉的生产工艺;从药剂学的角度研究不同工艺参数对丹七粉质量属性的影响;探索关键工艺参数与关键质量属性的数学模型,构建生产工艺操作空间并验证其科学性。2、建立丹七粉含量测定方法,并确定有效成分含量的变化范围。3、研究并建立丹七粉高效液相指纹图谱。4、研究并确定丹七粉的包装材料、储存条件和有效期。方 法:1、基于QbD理念,以丹参、三七药材的洁净指数、水分、出粉率、有效成分含量及丹七粉的溶出度、均匀度和有效成分转移率为评价指标,进行丹参、三七药材净洗方法、频率、功率、时间,干燥方法、温度、功率、时间,粉碎方法、温度、时间、细度以及丹七粉混合方法、频率、时间等单因素筛选和多因素显著性试验,以确定关键工艺参数。采用中心点复合设计试验,建立关键工艺参数与关键质量属性之间的数学模型,并对试验结果建立多元二次回归方程;应用Minitab15软件对最优模型进行计算并获得生产工艺操作空间及其可接受范围,并对所得工艺操作空间进行验证。以不同产地来源的丹参、三七药材为原料,制备10批丹七粉以确认生产工艺的科学性。2、采用高效液相色谱法对丹七粉有效成分进行含量测定方法学研究,建立并验证丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1含量测定方法;测定10批丹七粉有效成分含量,并以均值加减3倍标准偏差来规定有效成分的变化范围。3、采用高效液相色谱法对10批丹七粉的指纹图谱进行研究,以国家药典委员会指纹图谱相似度评价软件(2012年版)对高效液相指纹图谱进行分析,从而建立丹七粉高效液相指纹图谱。4、采用高温、高湿、强光试验以确定产品的储存条件;分别对包装于聚乙烯复合膜、镀锡复合膜、铝箔复合膜内的丹七粉进行加速和长期稳定性试验,以优选出适宜的包装材料并确定产品有效期。结 果:1、基于QbD理念,对丹七粉生产工艺参数进行了单因素和因素试验,建立了关键工艺参数与关键质量属性的回归方程即:(1)丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹酚酸B的转移率Y1=83.365—0.035X1+1.082X2—0.165X4—1.088 × 10-4X1X2+1.833 × 10-5 X1X4+3.967 ×10-4X2X4+4.027 × 10-5X12—0.011X22+3.113 × 10-4X42;(2)三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1及人参皂苷 Rb1 转移率 Y2=64.071—0.07X1-0.069X3+0.763X4—9.638 × 10-5X1X3+5.611 × 10-4 X1X4+2.804 × 10-4X3X4+3.477 × 10-5X12+4.149×10-5X32—3.436×10-3X42;(3)混合均匀度 Y3=81.929—0.341X5+2.323X6—0.029X5X6+0.025X52—0.052X62;(X1、X2、X3、X4、X5、X6 分别表示净洗功率、干燥温度、干燥功率、粉碎细度、混合频率、混合时间)。构建并验证了丹七粉生产工艺数学模型,确立了丹七粉生产工艺操作空间。2、建立并验证了:(1)以乙腈为流动相A,0.02%磷酸为流动相B进行梯度洗脱,检测波长为270nm的丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量测定方法;(2)以乙腈-0.1%磷酸(22:78)为流动相,检测波长为286nm的丹酚酸B含量测定方法;(3)以乙腈为流动相A,水为流动相B进行梯度洗脱,检测波长为203nm的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1含量测定方法。确定了丹七粉中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA总含量范围为2.57mg/g～3.35mg/g;丹酚酸B含量范围为23.98mg/g～27.46mg/g;人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的总含量范围为37.89mg/g～42.69mg/g。3、建立了丹七粉高效液相指纹图谱,标定了 19个共有峰,辨识了隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb17个有效成分的色谱峰,10批丹七粉的指纹图谱相似度均在0.980以上。4、初步确定丹七粉的储存条件为:置阴凉干燥处、避光保存,最佳包装材料为药用铝箔复合膜,产品的有效期在18个月以上。结 论:本课题基于QbD理念设计的丹七粉生产工艺稳定可靠、重现性好,可为丹七粉的大规模生产提供科学依据。所建立高效液相色谱含量测定及指纹图谱分析方法准确、稳定、重复性好。初步确定了丹七粉储存条件和有效期,选取的包装材料能保证产品质量稳定。可为全面控制丹七粉的质量和临床应用研究提供参考。