目的:将人真皮组织和生理盐水按一定体积比例混合后用自行研发的可控温高速软组织匀浆机(以下简称匀浆机)制备成可注射人微粒化真皮匀浆(以下简称真皮匀浆),以可通过27G针头为纳入标准探索其制备条件。通过肉眼及扫描电镜观察真皮匀浆、镜下观察真皮匀浆的HE染色切片、DAPI染色,探索其宏观及微观结构,通过cck-8试剂盒检测真皮匀浆对成纤维细胞的细胞毒性,从而探索可注射人微粒化真皮匀浆作为可注射软组织填充材料的可行性。通过观察其在Wistar大鼠真皮内的降解性,研究真皮匀浆作为可注射软组织填充材料在动物体内的填充效果。以期探索性能良好的可注射软组织填充材料。方法:1.无菌条件下,用组织剪去掉皮肤组织多余的皮下脂肪组织及浅筋膜后,用0.5%的DispaseⅡ酶去表皮处理。将各参数条件:真皮组织与生理盐水的体积比例分别为1:3、1:5、1:9,匀浆机的转速分别为转速1000rpm、3000rpm、5000rpm,时间为7min、9min、11min,排列组合形成27组制备参数。在各组参数条件下制备成混悬液,将上述制备成的真皮混悬液分别通过80目、120目筛网,制备成粒径范围大小不同的可注射人微粒化真皮匀浆,以真皮匀浆能无阻力通过27G针头为标准,得出适宜的体积比、转速、时间,从而探索出制备真皮匀浆的相关参数。无菌环境下,以上述探索得出的参数条件制备出满足条件的可注射人微粒化真皮匀浆,并将通过80目、120目筛网所得的真皮匀浆分别记为A液和B液,将A液和B液离心后,弃掉部分上清液使真皮组织与生理盐水的体积比例约为1:1,振荡摇匀后密封保存于4℃冰箱,以用于动物实验。2.通过肉眼观察真皮匀浆大体外观,镜下观察真皮匀浆的HE染色、DAPI染色,扫描电镜观察真皮匀浆的微粒大小及均一性,探索其宏观及微观结构;将真皮匀浆离心后得到沉淀即真皮组织,以此提取人成纤维细胞并扩大培养,取第3代人成纤维细胞接种在含有真皮匀浆的培养基中体外培养,使用cck-8试剂盒检测细胞在450nm波长处的OD值,从而测出真皮匀浆对人成纤维细胞的细胞毒性。3.取15只Wistar大鼠,用纹眉液在大鼠背部一侧作4个直径为1.5cm的圆圈作为标记,所标范围为注射区域,分别记为A、B、C、D组,采用27G针头、1ml空针,将A液和B液分别取0.2ml注入大鼠背部A、B组实验范围的皮肤真皮深层,用4号半针头多点、均匀、散在空扎C组,D组不做任何处理,作为空白对照组,分别于注射后第2周、4周、6周随机抽取5只大鼠,切取大鼠背部各实验区域的皮肤全层,行HE染色、Masson染色。观察皮肤组织真皮层炎性改变、超微结构、成纤维细胞及胶原纤维增生等情况的改变,用Image Pro Plus6.0软件测量真皮层厚度,测量所得的结果采用SPSS24.0软件进行统计学处理。结果:1.用可控温高速软组织匀浆机可以制备出可通过27G针头的可注射人微粒化真皮匀浆,且制备的相关条件参数为:真皮组织与生理盐水的体积比例为1:5、转速为3000rpm、时间为9min。2.大体观察真皮匀浆为乳白色的均质混悬液,离心后可分为上下两层,上层为清亮透明无色的上清液,下层为呈白色泥状的真皮组织沉淀物;倒置相差显微镜观察沉淀物HE染色切片可见成纤维细胞胞核和排列疏松的胶原纤维;扫描电镜下观察真皮匀浆的涂片可见真皮匀浆中均匀分散的真皮微粒,及树枝状的胶原纤维,测量视野内匀浆颗粒粒径大小并取平均值,得A液粒径大小为(982.6±238.5)nm,B液粒径经大小为(161.7±36.6)nm。3.荧光显微镜下观察真皮匀浆的DAPI染色可见组织内散在分布的细胞核;用酶消化法提取真皮匀浆中的成纤维细胞,提取的成纤维细胞活性良好,使用CCK-8试剂盒检测该真皮匀浆对成纤维细胞的细胞毒性,测450nm波长处的OD值,结果显示,随着培养天数的增加,OD值逐渐升高,A、B、C三组的OD值增幅相当,分别比较A、B组组间细胞毒性,结果显示无显著性意义(P>0.05)。4.将真皮匀浆注入Wistar大鼠体内后,第3天左右观察大鼠背部实验区域,见A、B组的注射区域皮肤有轻微红肿、无分泌物等炎症反应表现,C组红肿较明显,一周后红肿皆逐渐消退,后标记处皮肤颜色皆逐渐恢复正常,并可见大鼠背部皮毛长出。5.于第2、4、6周各时间点分别随机抽取5只大鼠,切开皮肤未见积液、积脓等现象。A、B两组真皮厚度厚于C组与D组,随时间变化,A、B两组真皮厚度初期较平稳,后期略有降低,C、D组保持平稳。组织学观察见,初期A、B、C三组皆有大量成纤维细胞,亦可见中性粒细胞、淋巴细胞等。后中性粒细胞逐渐减少,淋巴细胞增多,D组为正常组织,未见明显炎性细胞变化。注射术后2w、4w、6w,A组真皮厚度分别与C组、D组进行统计学分析,均有显著性差异(P<0.05);B组真皮厚度分别与C组、D组进行统计学分析,均有显著性差异(P<0.05);C组及D组进行统计学分析,无显著性差异(P>0.05)。结论:1.用自行研制的匀浆机可以成功制备出可通过27G针头的的可注射人微粒化真皮匀浆,且制备的相关条件参数为:真皮组织与生理盐水的体积比例为1:5、转速为3000rpm、时间为9min。肉眼观察真皮匀浆为乳白色的均质混悬液,其真皮微粒粒径大小均一,真皮匀浆中胶原分散疏松。真皮匀浆中成纤维细胞活性良好,真皮匀浆对人成纤维细胞无细胞毒性,具备作为可注射软组织填充材料的可行性。2.可注射人微粒化真皮匀浆注入动物真皮深层后可通过直接、间接作用促进真皮组织增厚,从而起到抗皮肤衰老的作用,可有望成为一种方便取材,且性能良好的新型可注射软组织填充材料。