目的 基于AB-SCIEX 6500系统建立一种液相色谱串联质谱方法（LC-MS/MS）检测血清中6种维生素D代谢产物（25OHD3、25OHD2、24,25（OH）2D3、24,25（OH）2D2、4β,25（OH）2D3和1α,25（OH）2D3）并对该方法进行性能评价,同时探索维生素D代谢产物在临床中的应用价值。方法 方法学的建立及评价。1.建立非衍生法维生素D代谢产物LC-MS/MS方法学,参照美国临床和实验室标准协会发布的C62-A文件程序对该方法的精密度、线性范围、检测限和定量限、干扰、基质效应和加标回收率评估该方法的可行性。2.建立PTAD衍生法维生素D代谢产物LC-MS/MS联测方法学,同时对该方法的精密度、线性范围等性能进行评估。3.纳入58例表观健康人,并于2020年12月-2021年1月采血,应用Beckman Coulter AU5800 全自动生化分析仪测定包括 Cr、UA、Glu、TC、TG、ALT、Alb、ALP、Ca、P等生化指标,排除生化指标异常个体。检测以上受试者血清6种维生素D代谢产物并分析各维生素D代谢产物在表观健康人群中的分布并对各代谢产物间关系进行初步探索。结果1.非衍生法维生素D代谢产物LC-MS/MS结果显示,25OHD3、25OHD2、24,25（OH）2D3、24,25（OH）2D2、1,25（OH）2D3、1,25（OH）2D2 的总精密度 CV%分别为 6.30%-8.40%、5.00%-8.40%、5.90%-9.00%,5.60%-9.00%、5.60%-8.00%和7.00%-9.70%。25OHD3、25OHD2、24,25（OH）2D3、24,25（OH）2D2、1,25（OH）2D3、1,25（OH）2D2 的线性分别为 1.56-200ng/ml、0.78-100ng/ml、0.1-51.2ng/ml、0.1-52.6 ng/ml、40-10000 pg/ml 和 40-10000 pg/ml。以上 6 种维生素 D 代谢产物加标回收结果分别为 92.9%-105.1%,100.3%-108.2%,90.2%-98.0%,90.9%-98.9%,96.8%-102.1%,84.6%-98.2%。同时能够与 3-epi-25OHD3、3-epi-24,25（OH）2D3、23R,25（OH）2D3和4β,25（OH）2D3四种干扰物质进行有效分离。2.PTAD衍生法维生素D代谢产物LC-MS/MS联测法结果显示,250HD3的总精密度为6.2-9.0。25OHD2的总精密度为9.4%-11.8%。24,25（OH）2D3的总精密度为2.9%-4.1%。24,25（OH）2D2 的总精密度为 4.3%-5.6%。4β,25（OH）2D3 的总精密度为 8.2%-10.6%。1α,25（OH）2D3 的总精密度为 9.1%-13.7%。25OHD3、25OHD2、24R,25（OH）2D3、24R,25（OH）2D2、1α,25（OH）2D3 和 4β,25（OH）2D3 的加标回收结果分别为 93.1%-109.3%,106.2%-109.1%,92.7%-95.3%,98.1%-110.3%,99.6%-103.1%,98.1%-109.0%。3.纳入研究的58例受试者中女性30例,男性28例,平均年龄42.6±14.9岁。血清 25OHD3,24,25（OH）2D3,4β,25（OH）2D3 和 1,25（OH）2D3 的浓度均值分别为 17.0± 10 ng/mL,1.82± 1.8 ng/mL,25.6± 15.2 pg/mL and 20.3±8.5 pg/mL。24,25（OH）2D3、4β,25（OH）2D3和 25OHD3 的相关性良好,R2分别为0.937和 0.789（P＜0.001）。1α,25（OH）2D3 与 25OHD3 的相关性较差,R2 为 0.028（P＜0.001）。24,25（OH）2D3和4β,25（OH）2D3之间存在较好的相关性,R2为0.748（P＜0.001）。结论1.本研究建立的非衍生LC-MS/MS法能同时测定6种维生素D代谢产物,且前处理简便、运行时间短,同时精密度、线性和抗干扰能力均能满足检测需求,但不能准确定量4β,25（OH）2D3。2.本研究建立的PTAD衍生LC-MS/MS法能够对4β,25（OH）2D3等6种维生素D代谢产物准确定量,同时灵敏度、精密度等满足临床需求。3.本研究初步探索了 4β,25（OH）2D3等维生素D代谢产物在表观健康人中的关系,24,25（OH）2D3和4β,25（OH）2D3之前相关性较好,4β,25（OH）2D3的代谢率不随着25OHD浓度的增加而增大,可能成为24,25（OH）2D代谢率的替代指标。