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目的:构建表达HBx的HBx-pcDNA3.1质粒,观察HBX对HMGB1的表达的影响;并筛选出能有效抑制HMGB1表达的小干扰RNA,为探索HBX、HMGB1的相互关系奠定实验基础。 方法:从HepG22.15细胞扩增出野生型HBX基因片段并连接到pcDNA3.1载体质粒,将质粒转染到两种不同的肝细胞株(HepG2、LO2细胞),用G418筛选稳定表达HBx的细胞,观察瞬时转染48小时后及稳定表达HBx的细胞系中HMGB1的蛋白表达水平。用Lipo2000脂质体将三种下调HMGB1表达的小干扰RNA(si-RNA)转入HepG22.15细胞,筛选出干扰HMGB1表达最有效的一种,为进一步研究做准备。 结果:HBX基因瞬时转染48小时后,HepG2及LO2细胞中HMGB1表达均明显上升;稳定细胞系HepG2-HBx建系一个月后,HMGB1表达水平仍较阴性质粒对照组高;稳定细胞系LO2-HBx建系若干年后,HMGB1表达水平较空白质粒对照组表达下调。成功筛选出有效干扰HMGB1表达的si-RNA。 结论:成功构建了HBx表达质粒,HBX基因可上调HMGB1的表达。