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第一部分
1Q,25-二羟维生素D3对黑素细胞增殖及黑素合成影响的研究
目的:探讨1α,25-二羟维生素D3对黑素细胞增殖及黑素合成的影响。
方法:用环切法取正常人包皮,于体外培养黑素细胞,选择对数生长期的细胞进行测定。黑素细胞培养液中加入不同浓度的1a,25一二羟维生素D3,继续培养48小时后,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)在酶标仪上测定A值,观察1α,25-二羟维生素D3对黑素细胞增殖的影响;采用酶学方法测定黑素细胞酪氨酸酶活性,用NaOH法处理后测定黑素细胞黑素的含量。
结果:10-9~lO-5mol/L浓度范围的1α,25-二羟维生素D3对体外培养的黑素细胞的增殖具有促进作用,其中以10-7mol/Llα,25-二羟维生素D3对黑素细胞的促增殖作用最为明显,但与空白对照组比较无统计意义(P>O.05)。10-9、10-8mol/L浓度的1α,25-二羟维生素D3明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性,同时促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%,123%(PO.05)。
结论:lα,25-二羟维生素D3能促进黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成,对黑素细胞生长无抑制作用。
第二部分
维生素D3衍生物对黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形转录因子的蛋白和基因的调节作用
目的:1Q,25一二羟维生素D3可促进黑素细胞的黑素合成,因酪氨酸酶和小眼畸形转录因子(MITF)与黑素细胞的分化关系密切,为探讨1Q,25一二羟维生素D3作用于黑素细胞分化的分子机制,设计本实验以观察1α,25-二羟维生素D3对黑素细胞酪氨酸酶及转录因子一MITF的影响。
方法:于体外黑素细胞培养液中,分别加入10-9、10-7、lO-5mol/1浓度的lα,25-二羟维生素D3,设不加药组为对照,培养24小时,用Westernblot及盯-PCR的方法检测黑素细胞的酪氨酸酶及转录因子-MITF的蛋白及mRNA的表达。
结果:与空白组比较,10-9、10-7和lO-5mol/1浓度的1α,25-二羟维生素D3使黑素细胞MITF蛋白的表达均增加,分别为157.08%、138.2%,97.9%,差异均具有统计学意义(PO.05)。2月后治疗侧为53.3%,对照侧为26.7%,两侧的X2=6.125,(P0.05)。联合治疗侧的有效率为45.7%,总有效率71.43%,单照光治疗侧分别为25.7%和54.3%(P<0.05)。
结论:他卡西醇外用联合单频准分子光治疗白癜风有效而且安全,可增强MEL308-nm的疗效,提早色素再生的时间和减少照光的能量。