RF酰胺相关肽-3(RFamide-related peptide-3, RFRP-3)是促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone, GnIH)在哺乳动物体内的同系物,它对动物的生殖、摄食、应激及行为有调节作用。RFRP-3/GnIH在许多物种中的基因序列、结构、表达分布以及生物学功能的研究先后被报道。由于RFRP-3具有调节动物生殖和摄食的双重作用,科学家们推测RFRP-3可能参与动物的繁殖营养调控。目前,对于RFRP-3在绵羊组织中的表达以及其是否参与繁殖营养调控的研究还未见报道。本试验以3月龄雌性绵羊为研究对象,在研究RFRP-3基因在幼龄绵羊各组织中的特异性表达及RFRP-3蛋白在幼龄绵羊卵巢组织中表达定位的基础上,采用限饲的方法首先研究限饲是否影响幼龄绵羊卵巢的发育,然后研究RFRP-3以及GnRHR、FSHR、LHR基因在下丘脑-垂体-卵巢轴的表达。通过以上研究探讨RFRP-3在幼龄绵羊生殖发育过程中的作用,以及其参与繁殖营养调控的机制。1. RFRP-3基因在幼龄绵羊各组织中的表达情况应用普通PCR和荧光定量PCR检测RFRP-3基因在幼龄绵羊各组织中表达情况,结果表明RFRP-3基因在延髓中表达量最高,其次在眼、卵巢、脊髓、子宫和下丘脑等组织中表达量较高,在心、肝、脾、肺和肾等组织中表达量相对较低。这个结果揭示了RFRP-3在幼龄绵羊各个组织中具有广泛的分布,且在中枢神经系统和生殖系统中表达量相对较高,而在内脏及消化系统中表达量较低,这可能与RFRP-3的生物学功能有关。2. RFRP-3蛋白在幼龄绵羊卵巢组织中的表达定位应用免疫组化的方法研究RFRP-3蛋白在幼龄绵羊卵巢的各级卵泡中的表达情况。结果表明,RFRP-3在各级卵泡的卵母细胞中都有表达。在原始卵泡和初级卵泡的颗粒细胞中没有发现RFRP-3的表达。而RFRP-3在次级卵泡的颗粒细胞和卵泡膜细胞中不表达或微弱表达,在三级卵泡的颗粒细胞和卵泡膜细胞中有较强表达。RFRP-3在卵巢间质和卵巢膜中有微弱的表达。这个结果暗示RFRP-3在幼龄绵羊卵巢组织中有特异性分布,可能对卵泡发育及卵巢功能有调节作用。3.限饲对幼龄绵羊卵巢发育的影响研究高水平限饲(50%自由采食量)和低水平限饲(70%自由采食量)对幼龄绵羊卵巢发育的影响。结果表明,经过47天的不同水平饲喂,高水平限饲和低水平限饲极显著降低了幼龄绵羊的卵巢体积、卵巢重和体重。高水平的限饲显著降低了“卵巢重／体重”的比值。对卵巢组织采用石蜡切片及HE染色后分析结果表明,限饲对幼龄绵羊的原始卵泡和初级卵泡的数目影响不显著。然而,高限饲组极显著降低了次级卵泡和三级卵泡的数目。限饲对卵泡闭锁率的影响不显著,但是高限饲组显著降低幼龄绵羊的卵泡募集率。这个结果证明限饲对幼龄绵羊的卵巢发育有抑制作用。4.限饲对幼龄绵羊RFRP-3、GnRHR、FSHR和LHR基因在下丘脑-垂体-卵巢轴表达的影响通过荧光定量PCR研究高水平限饲(50%自由采食量)和低水平限饲(70%自由采食量)对幼龄绵羊下丘脑-垂体-卵巢组织中RFRP-3、GnRHR、FSHR和LHR基因表达的影响。结果表明：限饲显著提高RFRP-3在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达。相反,限饲显著抑制了GnRHR、FSHR和LHR基因在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达。结果暗示限饲导致RFRP-3的表达上调,通过RFRP-3抑制下丘脑-垂体-卵巢轴从而抑制卵巢的发育,进一步验证了RFRP-3参与繁殖营养调控。以上试验结果证明,RFRP-3基因在幼龄绵羊各组织中具有广泛的分布,主要集中在中枢神经系统和生殖系统中；受限饲影响,RFRP-3可能通过下丘脑-垂体-卵巢轴抑制卵巢发育。为研究RFRP-3的生物功能以及其参与动物繁殖营养调控提供了依据。但其具体的调节机制以及与其它调节因子之间的相互作用还需要进一步的研究。