益生菌联合微酸性电解水对鲫抗嗜水气单胞菌能力的影响

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鲫(Carassius auratus)是我国比较常见的淡水鱼类之一,具有生长繁殖快、抗病力强、食性广、环境适应性强等优点。然而随着高密度集约化养殖模式的兴起,水质恶化,鲫应激抗病能力降低,容易感染嗜水气单胞菌,细菌病爆发严重。益生菌能够净化水质,调节肠道微生态平衡,增强机体免疫力,并且不会产生耐药性问题,可以从根本上防治各种鲫细菌病。但是当致病菌浓度较高时,益生菌对病害的防治效果会大大降低。微酸性电解水杀菌快速高效,对人体和环境无害,不易残留。但是高浓度会损伤鲫组织,低浓度会导致杀菌效果不佳,不能彻底地控制病害。因此,本研究结合益生菌和微酸性电解水两者的优点,联合治疗鲫细菌病,以减少抗生素类药物和消毒剂的使用。以期为鲫细菌病找到一种绿色、高效、安全的防治方法。主要研究内容和结果分以下几个方面:1.为了研究在不同条件下微酸性电解水对嗜水气单胞菌的杀菌效果。本文利用有效氯浓度为30 mg/L的微酸性电解水处理嗜水气单胞菌后,通过平板计数法、扫描电镜法和琼脂糖凝胶电泳法观察其活菌数、细菌形态以及DNA含量的变化情况。结果表明,当体积比为1:20,处理时间为5 min时,细菌基本上全部失活。另外,微酸性电解水还能使嗜水气单胞菌细胞出现不同程度的溶解,DNA发生降解,而且细胞受损程度和DNA降解程度均与体积比和处理时间呈正相关。2.为了研究微酸性电解水对鲫肠道内酶活性以及鳃、肠道组织形态的影响。本文采用有效氯浓度为3 mg/L的微酸性电解水对鲫处理不同时间后,分别测定其肠道内SOD、ACP、LPS、AMS活性,并通过石蜡切片观察鳃、肠道组织形态。结果显示,当用微酸性电解水处理10 min时,鲫肠道内SOD、ACP、LPS、AMS活性以及鳃、肠道组织形态与对照组相比无明显差异。随着微酸性电解水处理时间的延长,鲫肠道内SOD、LPS活性均呈现先升高后降低的趋势;ACP、AMS活性均呈现逐渐降低的趋势;鳃小片发生卷曲,鳃丝上皮细胞大量增生,将鳃小片完全包裹住,有部分鳃小片完全断裂破损;相邻肠绒毛之间发生融合,柱状细胞、杯状细胞和淋巴细胞出现明显增生现象,肠粘膜上皮细胞完全变形、脱落、坏死。综上所述,用有效氯浓度为3 mg/L的微酸性电解水消毒10 min对鲫的生长是安全的。3.本研究采用锐孔凝固浴法和复凝聚法复合法,以海藻酸钠和壳聚糖为壁材,将嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和饲料包埋起来制备成益生菌微胶囊饲料,并对其最佳制备工艺参数进行了研究。结果表明:制备嗜酸乳杆菌-双歧杆菌益生菌微胶囊饲料的最佳工艺参数为海藻酸钠浓度1.25%,菌胶比例1:10,氯化钙浓度1.5%,固化时间15 min,壳聚糖浓度1.5%。在这个工艺条件下,制备的益生菌微胶囊饲料粒径大小均匀,在1.60~2.00 mm;包埋率达到96.68%;而且在水中浸泡12 h后,悬浮率为77.96%,溶解率为13.04%;在模拟人工胃液中处理120 min后,仍然有5.2 lg(CFU/m L)的活菌数;在模拟人工肠液中处理120 min后,所包埋的活菌可全部释放出来,具备较好的漂浮性、水稳定性、耐酸性以及肠溶性。4.为探究单独或同时使用嗜酸乳杆菌-双歧杆菌益生菌微胶囊饲料和微酸性电解水对抑制鲫感染嗜水气单胞菌的效果。本试验分成4个处理组:对照组(基础饲料)、益生菌组(嗜酸乳杆菌-双歧杆菌益生菌微胶囊饲料)、微酸性电解水组(微酸性电解水处理染病鲫)和复合法组(嗜酸乳杆菌-双歧杆菌益生菌微胶囊饲料和微酸性电解水结合)。养殖56 d后,对所有试验鲫均注射等量的嗜水气单胞菌,然后分别记录72 h内各组鲫的死亡情况,计算存活率。结果显示,与对照组鲫的存活率相比,微酸性电解水组鲫的存活率提高了6.66%,益生菌组鲫的存活率提高了11.66%,复合法组鲫的存活率提高了16.66%。
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