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乙烯在植物生长发育及逆境应答中发挥重要的作用,其生理作用是通过调控信号转导途径相关基因的表达实现的。Ethylene-insenstives3(EIN3)和EIN3-like(EIL)是乙烯信号转导通路的关键转录因子,然而关于茶树EIN3/EILs转录因子及其在胁迫条件下的变化特征尚不清楚。进一步探究茶树CsEIN3/EILs转录因子家族在不同非生物胁迫下的表达特征对培育抗逆性较强的茶树新品种具有重要的意义。本文主要对四个茶树CzsEIN3/EILs基因进行了cDNA克隆、鉴定及其表达特征分析、转录激活活性验证和转基因拟南芥的表达分析。主要研究结果如下:1.基于茶树基因组和本课题组盐胁迫转录组数据库,克隆了四条茶树CsEIN3/EILs基因,分别命名为CsEIL1、CsEIL2、CsEIL3和CsEIL4。CsEIL1基因开放阅读框为1827 bp,编码609个氨基酸;CsEIL2基因开放阅读框为1872 bp,编码624个氨基酸;CsEIL3基因开放阅读框为1885 bp,编码595个氨基酸;CsEIL4基因开放阅读框为1917 bp,编码639个氨基酸。理化性质分析表明:CsEIL1、CsEIL2、CsEIL3和CsEIL4分子量分别为68.7、70.3、67.2、71.6 kD,理论等电点分别为5.14、5.53、6.31、5.60。在线TARGETP1.1预测CsEIL1、CsEIL2、CsEIL3和CsEIL4均定位于细胞核。多序列比对显示四个CsEIN3/EILs蛋白N端高度保守,含有多个高度保守的EIN3功能结构域,即酸性氨基酸区、碱性氨基酸簇以及脯氨酸富集区,而C端保守性较低。2.基于qRT-PCR数据分析表明,4个CsEILs基因的表达量因组织不同而异,其表现为CsEIL1、CsEIL3和CsEIL4的表达量在茎中较低,在嫩叶中较高;CsEIL2在根、茎、花中的表达水平没有显著差异,均低于其在叶中的表达水平。另外,CsEIN3/EILs受乙烯、ABA、NaCl、PEG以及温度不同程度的诱导,但其表达水平和表达特征存在差异。具体表现为:在200 mM NaCl处理下,4个CsEILs表达量的最大值均出现在6 h,但其峰值不同,分别为对照的5、11、2和4.5倍。表明CsEILs对盐胁迫响应的程度存在差异。当用0.5%乙烯溶液处理后,CsEILs表达水平整体呈现先增加再降低的变化趋势,但CsEIL1、CsEIL2、CsEIL4在处理后的3 h显著上升至最大表达量,而CsEIL3则在处理后的6 h上升至最大值,说明乙烯能够诱导CsEILs在转录水平发生变化且不同成员对乙烯的敏感度不同。ABA处理诱导CsEILs表达水平逐渐增加,在处理后48h达到最大,表明CsEILs对ABA的响应不敏感。PEG模拟干旱处理6 h,CsEILs表达量急剧增加,表明其参与对干旱胁迫的响应。CsEILs均受高低温的诱导表达,但表达水平和表达特征存在差异。高温(40℃)处理初期,CsEILs表达量出现略微下降,随后逐渐调表达。相对其他胁迫处理,表达量的变化幅度差异不大。CsEILs在低温(4℃)处理下呈现先上升再下降,随后小幅度上调最后下降至对照水平的变化趋势,表明CsEILs在温度胁迫调控中起重要作用。3.转录自激活活性鉴定试验表明,CsEIL1具有转录自激活活性,而CsEIL2没有转录自激活活性。基于qRT-PCR数据分析表明,CsEIL1和CsEIL2转基因拟南芥植株的基因表达量显著增加,同时转基因拟南芥ERF1表达量也显著高于野生型。