背景与目的:胃癌发病居世界常见肿瘤第五位,世界范围内超过70%的胃癌病例发生在亚洲人群中,胃癌在我国癌症相关死亡肿瘤中居第二位,其主要原因是胃癌早发现、早期诊断手段不足,大多数胃癌患者确诊时即处于进展期。目前手术为主的综合治疗获益渐近瓶颈,靶向治疗、免疫治疗、细胞过继疗法等逐渐成为重要补充治疗手段。胃癌预后差除了二级预防不足外,其自身异质性高、早期淋巴转移、化疗耐药等也是不容忽视的治疗难点,针对胃癌发生进展的实验研究是开辟胃癌治疗新局面的基础。肿瘤外泌体是目前肿瘤研究的热点方向之一,外泌体就像是肿瘤细胞的“信使”或肿瘤转移的“先头部队”,在肿瘤细胞间、肿瘤细胞与肿瘤间质间以及与远处脏器间信息物质交换中发挥重要作用,其中外泌体mi RNA在肿瘤侵袭及进展中扮演关键角色。目前关于胃癌外泌体mi RNA研究成果较少,本研究旨在发现胃癌进展相关的外泌体mi RNA,进一步研究其具体分子机制,为后续精准治疗提供参考。方法:选择特定胃癌患者血清样本后提取血清外泌体,使用高通量测序方法发现与胃癌分期相关的差异表达外泌体mi RNA;临床样本验证后确定与分期相关的差异表达外泌体mi RNA,结合研究标准及文献报道选择进入后续研究的外泌体mi RNA;选择胃癌细胞系按2水平处理（mi R-inhibitor和/或Exosome）后分为四组,使用MTT法、Annexin-V法、Transwell法、划痕实验及血管形成实验充分研究不同处理下胃癌细胞所呈现的表型改变,确定外泌体mi RNA对胃癌细胞生物学行为的影响;建立裸鼠移植瘤模型验证外泌体体内功能;使用共聚焦显微镜验证外泌体对mi RNA的转运;使用生物信息学数据库发现mi RNA的靶基因,结合文献及基因功能选择感兴趣靶基因;外泌体mi RNA与筛选出的拟验证靶基因的确切作用关系通过经典的双荧光素酶报告实验进一步验证;构建慢病毒mi RNA过表达载体及靶基因过表达载体,过表达载体使用慢病毒构建;胃癌细胞经2水平处理（2种过表达病毒转染）后分为四组进行功能实验,充分研究不同处理下胃癌细胞所呈现的表型改变,确定靶基因对细胞生物学行为的影响;使用Rt-Pcr及western-blot法对靶基因调节的下游信号通路进行探索。结果:4例晚期5例早期胃癌患者血清样本进行高通量测序及PCA分析后共发现36个差异表达mi RNA,取其中差异倍数较高的9个mi RNA进行后续验证（mi R-193b-5p、mi R-3173-5p、mi R-1228-5p、mi R-548a-3p、mi R-3613-3p、mi R-374b-5p、mi R-509-5p、mi R-6884-5p、mi R-450b-5p）。取早期及晚期各20例胃癌病例血清样本,Rt-Pcr法检测mi RNA水平,使用2–ΔΔCT法（U6为内参）分析结果,结果显示两组间9个mi RNA均存在表达差异,结合差异显著性及文献查找结果,我们选择mi R-450b-5p作为后续研究对象;测定各细胞系培养液外泌体mi R-450b-5p表达水平,AGS细胞相对低表达,SGC-7901相对高表达,选择AGS细胞为后续研究靶细胞,选择SGC-7901细胞培养上清为外泌体来源;胃癌细胞系按2水平处理（mi R-inhibitor和/或Exosome）分为四组后行功能实验,结果提示单纯外泌体孵育组胃癌细胞侵袭、迁移、增殖及促血管形成能力均显著高于其余三组（P<0.05）;裸鼠成瘤实验结果提示外泌体孵育组皮下瘤生长显著强于单纯细胞组;共聚焦显微成像实验可见SGC-7901细胞培养液上清外泌体可将标记后的mi R-450b-5p转运至AGS胃癌细胞胞质中;通过检索两个主流生物学信息数据库,按照既定标准将结果分析比对后,我们共筛选出20个符合标准的mi R-450b-5p靶基因,按相关性排序并结合文献报道后我们选择CMTM8进行后续验证,双荧光素酶报告实验显示mi R-450b-5能够显著抑制CMTM8 3’UTR-WT组荧光,突变位点后抑制作用消失;成功构建mi RNA及靶基因慢病毒过表达载体后,将胃癌细胞经2水平处理（2种过表达病毒转染）后分为四组行功能实验,结果提示靶基因CMTM8能抑制肿瘤细胞侵袭、迁徙能力,同时此抑制作用可被mi R-450b-5p削弱;使用western-blot方法对以上分组细胞进行EGFR信号相关通路关键蛋白检测,结果发现CMTM8高表达可抑制p-AKT及p-Erk水平,mi R-450b-5p能够削弱此种抑制作用。结论:细胞实验结果表明胃癌外泌体mi R-450b-5p能增强胃癌细胞侵袭性生物学行为,其具体分子机制为:CMTM8为mi R-450b-5p靶基因,CMTM8过表达能够抑制EGFR相关通路PI3K/AKT及RAF/MEK/ERK,外泌体mi R-450b-5p通过抑制CMTM8表达发挥促瘤作用。