基于适配体技术的重金属快速检测方法的研究

来源 :海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lvlianpeng2009
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核酸适配体是一段单链DNA或RNA,由于自身可折叠成一定的空间结构,能够以高亲和力和高特异性的结合靶物质。近些年来,由于其独特的性质得到广泛的关注,并展开了大量的研究,已经成功应用于生物传感器、分子影像、靶向治疗、流式分析、食品安全等领域。在产业界,适配体同样备受关注。《Nature Methods》将其评为2014年最值得关注的技术之一。本研究以适配体技术为基础,结合特异性双链染料PicoGreen,建立了一种快速、灵敏的Pb2+的荧光检测方法,又采用Hg2+适配体完成了对Hg2+和Ag+的同时检测;对于此段适配体开发了基于适配体技术的荧光试纸条,完成对Hg2+和Ag+的同时快速检测。主要研究了以下三部分:1.利用无标记适配体和特异性双链荧光染料PicoGreen,依据Pb2+和适配体互补链能够竞争结合在适配体上,随着Pb2+的浓度增加,和适配体互补的互补链就会减少,形成较少的双链,产生荧光变化,在此体系中,体系的荧光强度与Pb2+的浓度成反比,且在1ng~1 mg 6个数量级范围内成线性关系,并展示了良好的特异性和回收率,完成对简单水样中Pb2+加标测定。2.利用Hg2+适配体和PicoGreen染料,完成对Hg2+和Ag+的同时检测,由于Hg2+与T(胸腺嘧啶)形成高度稳定的T-Hg2+-T错配结构,而在Hg2+的适配体中存在多个C(胞嘧啶),Ag+与C可形成高度稳定的C-Ag+-C错配结构,所以此检测方法可以对Hg2+和Ag+同时检测。随着体系中Hg2+和Ag+浓度的增加,Hg2+和Ag+特异性的和适配体结合,从而导致双链的杂交减少,体系的荧光强度降低,以实现对Hg2+和Ag+的检测。当Hg2+在500 ppb~1 ppm之间显示很好的线性范围,而Ag+的结合力明显增强,在0.1 ppb~10ppm之间显示良好的线性关系,该方法操作简单,同样也展示了很高的特异性。3.基于Hg2+的适配体,开发了同时检测Hg2+和Ag+的荧光试纸条,并对Hg2+和Ag+同时检测,Hg2+适配体与Hg2+和Ag+结合从而不能和位于T线的互补链结合,使得荧光发生变化,从而建立了同时检测Hg2+和Ag+的荧光试纸条检测方法。在检测中,Hg2+和Ag+在500 ppb~1 ppm之间显示了良好的线性范围,相关系数为0.98,此方法简单,易行,方便生活中使用,且显示了良好的特异性。
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