采用分析组合技术对霍山石斛质量的初步研究

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目的:为提升霍山石斛质量标准,促进安徽道地药材品质提升,选取42批霍山石斛、10批铁皮石斛、8批铜皮石斛饮片为研究对象,采用分析组合技术对霍山石斛的质量进行初步研究与分析,并与铁皮石斛和铜皮石斛进行比较,探寻霍山石斛的专属成分,为完善霍山石斛质量标准提供理论依据。方法:1.通过HPTLC法建立薄高效薄层指纹图谱,探究霍山石斛的专属性薄层信息,从而达到鉴别霍山石斛目的,并对铁皮石斛、铜皮石斛加以区分。2.使用HPLC-CAD法对霍山石斛的指纹图谱进行研究,探寻霍山石斛与铁皮石斛、铜皮石斛不同的特征性成分。3.采取高效阴离子色谱联用安培检测器法对霍山石斛中的单糖含量、组成及组比例进行研究分析。4.采用HPLC-CAD法对霍山石斛中的单糖和寡糖的含量进行测定,分析其与铁皮石斛、铜皮石斛的差异。结果:1.采用HPTLC法建立高效薄层指纹图谱,确定了薄层色谱信息中的霍山石斛专属性斑点,并通过HPTLC法运用Chem Pattern软件,进行相似度评价与聚类分析,从而通过该法达到鉴别霍山石斛的目标,并对铁皮石斛和铜皮石斛加以区别。2.采用HPLC-CAD法初步建立了霍山石斛指纹图谱,确定了11个共有峰,并通过指纹图谱对霍山石斛与铁皮石斛和铜皮石斛进行比较,根据三者之间指纹图谱的差异,发现峰6在铁皮石斛中几乎缺失,因此此法可很好的对霍山石斛和铁皮石斛加以区分,但霍山石斛和铜皮石斛区分难度较大,通过对指纹图谱进一步研究发现峰6和峰12的峰面积在三者中差异较大,因此对其的比值进行研究,结果发现铁皮石斛<铜皮石斛<霍山石斛,比值范围分别为霍山石斛(6.0~7.2)、铁皮石斛(0.04~0.05)、铜皮石斛(3.5~5.0),这一规律为国内首创,命名为“米斛规则”。此规则可快捷高效的鉴定出霍山石斛、铁皮石斛、铜皮石斛三者之间的区别,为霍山石斛的质量控制提供了科学依据。3.利用高效阴离子色谱联用安培检测器法测定霍山石斛、铁皮石斛和铜皮石斛中六种单糖的含量,结果发现三种石斛中D-甘露糖、D-葡萄糖的含量均较高;D-甘露糖、D-葡萄糖、果糖、D-阿拉伯糖、半乳糖、D-木糖含量差异不明显;D-甘露糖、D-葡萄糖二者之间的比值相近。该方法不能更好的对霍山石斛进行有效的质量控制。4.HPLC-CAD法测定霍山石斛的单糖与双糖的含量,此法不需水解,可直接测定霍山石斛中游离的糖,并对铁皮石斛和铜皮石斛中单糖和寡糖的含量进行比较,结果表明霍山石斛中蔗糖含量较高,蔗糖含量:霍山石斛>铜皮石斛>铁皮石斛;葡萄糖含量:铜皮石斛>霍山石斛>铁皮石斛;果糖含量:霍山石斛>铁皮石斛>铜皮石斛,可考虑作为霍山石斛质量控制指标。结论:HPTLC法确立了薄层信息中的霍山石斛专属性成分、高效薄层指纹图谱特征峰和共有峰;建立霍山石斛的HPLC-CAD指纹图谱,确定11个共有峰,建立了“米斛规则”,即通过峰6和峰12的峰面积的比值范围能快捷高效的鉴别霍山石斛、铁皮石斛、铜皮石斛三者之间的区别;采用离子色谱(HPAEC-PAD)法对不同石斛中的单糖类成分进行了定量分析,得出三种石斛各单糖含量之间差异不大,不能更好的控制霍山石斛的质量,而HPLC-CAD法对霍山石斛中单糖与寡糖进行测定,并与铁皮石斛和铜皮石斛进行比较,发现霍山石斛中蔗糖含量较高,因此从糖谱分析的角度对霍山石斛质量标准进行提高,该法具有一定的可行性。以上均为霍山石斛的质量控制提供了技术支持和科学依据。
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