不结球白菜（Brassica campestris ssp. chinensis Makino）原产我国，是我国南方地区普遍种植的大众化蔬菜，在蔬菜的周年供应中起着重要作用。但很多不结球白菜品种在我国北方地区不能露地越冬；在长江以南地区遇到低温也会造成冷害或冻害，影响其产量和品质。 本研究以四个不结球白菜品种为材料，研究了影响其外植体再生的若干因素，建立了高效分化再生体系及转化体系。在按植物偏爱密码子人工合成了昆虫抗冻肽THPI基因的基础上，构建了抗冻基因植物转化载体AP43，以农杆菌介导法转入不结球白菜。研究结果如下： 1．不结球白菜品种间在分化条件和分化频率上存在很大差异。苏州青在MN+TDZ2mg/L+NAA0.5mg/L+AgNO₃7.5mg/L条件下，不定芽再生频率达36.7％；AB系在MS+BA10mg/L+NAA0.3mg/L条件下分化率最高，达41.7％；短-126，在MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L+Ag5mg/L条件下达36.7％；98H秋-31与苏州青的条件相同，但分化频率不同，在MS+TDZ2mg/L+NAA0.5mg/L+AgNO₃7.5mg/L条件下，分化率达42.2％。 2．对苏州青、短-126和98-H秋31，硝酸银能明显提高其子叶分化率，而对AB系则作用不明显。加入硝酸银的浓度依品种而不同。 3．苗龄对子叶的分化率有很大的影响，6～8天苗龄范围内影响不是很大，但苗龄大于9天和小于5天时，则分化率明显降低。 4．抗生素Km对不结球白菜子叶的分化有强烈的抑制作用。当培养基内 含sing／L的Km时，子叶不能分化形成不定芽，且愈伤白化；培养基中Km 为匕 时，不能形成愈伤。所以筛选应选用后期选择法。 5．用根．癌农杆菌介导法将 GUS基因转化不结球白莱子叶，在附加 Cb 500渺的分化培养基上进行除茵培养，30天左右可分化出不定芽，转入 附加 Cb 300mg／L和 Km 15mg／L的筛选培养基上，每 15天转接一次，筛选 2一3次后，经GU s组织化学法和Pc凡S。Utham杂交检测，表现阳性。 6构建了抗冻基因植物转化载体AP43，以农杆菌介导法转入烟草，在烟 草上进行了目的基因的功能验证；以根癌农杆菌介导法将 THP基因导入不 结球白菜，获得两株GUS阳性芽。