元气虚损证动物模型下丘脑—垂体—甲状腺轴的变化及大补元煎作用机制的探讨

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:qiuyu19900318
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目的:古人在观察人体生命现象的基础上进行推测、联想、抽象,逐渐建立了中医学的气理论,历代医家在此基础上对元气进行探讨,逐渐形成了“中医元气论”。现代临床对以中医元气理论为指导的医疗和保健需求日益突显。但“元气”内涵的模糊性及“元气”客观测量标尺的缺乏影响了中医元气理论的进一步发展,一定程度上妨碍了中医元气理论在现代社会环境中的临床应用。本文分析中医学元气与下丘脑-垂体-甲状腺轴的关联性,思考元气虚损证与非甲状腺疾病综合征的相似性,讨论元气虚损证动物模型的研究思路,观察右侧肾切除术对SD大鼠元气及下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的影响,探寻客观测量中医学元气的适宜指标及大补元煎可能的作用机制。方法:1.理论探讨:搜集并学习跟中医学元气、下丘脑-垂体-甲状腺轴、中医证候模型有关的中医古籍文献和现代研究报道,分析中医学元气与下丘脑-垂体-甲状腺轴的关联性、元气虚损证与非甲状腺疾病综合征的相似性,讨论元气虚损证动物模型的研究思路。2.实验研究:对8周龄雄性SD大鼠施以右侧肾切除术,术后第3周开始给予培元固本法干预,以下丘脑-垂体-甲状腺轴为切入点,观察手术后大鼠一般情况,监测耳温、体重,进行自主行为活动检测及水迷宫实验,ELISA法检测下丘脑-垂体-甲状腺轴主要激素血清含量及肝脏脱碘酶活性,荧光定量PCR检测下丘脑-垂体-甲状腺轴功能调节相关基因及肝脏1型和3型脱碘酶基因mRNA的表达,Western blot法检测下丘脑-垂体-甲状腺轴功能调节相关基因主要蛋白的表达。结果:1.大鼠的一般情况及耳温、体重:(1)右侧肾切除大鼠术后普遍出现毛发枯黄、蜷缩、扎堆、拱背、活动减少,部分出现烦躁,大便稀溏、伴或不伴矢气臭,尿液增多,呼吸浅、快甚至伴喘促。而空白组大鼠各方面无明显异常。(2)各时间点空白组大鼠耳温无明显变化。术后第1周,模型组、大补元煎高剂量祖(简称大高组)、大补元煎中剂量组(简称大中组)及大补元煎低剂量组(简称大低组)大鼠耳温较空白组高,但差异不具有统计学意义。术后第2周,模型组、大补元煎高剂量祖、大补元煎中剂量组及大补元煎低剂量组大鼠耳温较空白组低,但差异不具有统计学意义。术后第3周,模型组、大补元煎高剂量祖、大补元煎中剂量组及大补元煎低剂量组大鼠耳温与第2周相比,均有所回升,但都低于空白组;与空白组比较,模型组大鼠耳温降低(P<0.05);与模型组比较,大补元煎中剂量组大鼠耳温有升高(P<0.05)。术后第6周,与空白组比较,模型组大鼠耳温降低(P<0.05);与模型组比较,大补元煎中剂量组大鼠耳温有升高(P<0.05)。(3)各组大鼠一周体重增幅比较,术前1周及术后第1周各组大鼠无明显差异(p>0.05)。术后第3、5周,大中组大鼠一周体重增幅低于空白组及模型组(p<0.05)。术后第7周,与空白组比较,模型组、大补元煎高中低剂量组大鼠一周体重增幅均明显偏低(p<0.01)。2.行为学检测:(1)给药6周后自主行为活动检测,与空白组比较,模型组大鼠活动总路程明显偏短(P<0.01),平均速度明显偏低(P<0.01),休息时间明显偏长(P<0.01),中央时间明显偏短(P<0.01)。与模型组比较,大补元煎高剂量组大鼠平均速度偏高(P<0.05),休息时间明显偏短(P<0.01);大补元煎中剂量组大鼠活动总路程偏短(P<0.05),平均速度偏高(P<0.05);大补元煎低剂量组大鼠休息时间明显偏短(P<0.01),中央时间偏长(P<0.05)。(2)大鼠定位航行实验结果:与空白组比较,模型组大鼠游泳总路程明显偏长(P<0.01),平均速度明显偏低(P<0.01),找到平台所用时间明显偏长(P<0.01);与模型组比较,大补元煎高剂量组大鼠游泳总路程明显偏短(P<0.01),平均速度明显偏高(P<0.01),找到平台所用时间明显偏短(P<0.01);大补元煎中剂量组大鼠游泳总路程明显偏短(P<0.01),平均速度偏高(P<0.05),找到平台所用时间明显偏短(P<0.01);大补元煎低剂量组大鼠游泳总路程明显偏短(P<0.01),找到平台所用时间明显偏短(P<0.01)。(3)大鼠空间探查实验结果:与空白组比较,模型组大鼠穿越平台次数明显偏少(P<0.01),在目标象限的时间明显偏短(P<0.01)。与模型组比较,大补元煎中剂量组大鼠穿越平台次数偏多(P<0.05);大补元煎高剂量组大鼠在目标象限的时间偏长(P<0.05),大补元煎中剂量组大鼠在目标象限的时间明显偏长(P<0.01)。3.下丘脑-垂体-甲状腺轴激素血清含量检测:与空白组比较,模型组大鼠血清T4、FT4明显偏低(P<0.01)、T3偏低(P<0.05),rT3明显偏高(P<0.01),TSH偏低(P<0.05)。与模型组比较,大补元煎高、中、低剂量组大鼠血清FT4偏高(P<0.01),rT3明显偏低(P<0.01);大补元煎中、低剂量组大鼠血清T3偏高(P<0.05)。4下丘脑-垂体-甲状腺轴甲状腺功能调节基因及蛋白表达:与空白组比较,模型组大鼠下丘脑TRH基因、垂体TRHR基因、甲状腺TSHR基因mRNA表达下调;与模型组比较,大补元煎中剂量组大鼠TRH基因mRNA表达上调,大补元煎高、中、低剂量组大鼠垂体TRHr基因mRNA表达不同程度上调,大补元煎中剂量组大鼠甲状腺TSHR基因mRNA表达上调。与空白组比较,模型组大鼠下丘脑TRH蛋白与垂体TRHR蛋白下调;与模型组比较,大补元煎高、中、低剂量组大鼠垂体TRHR蛋白上调。与空白组比较,模型组大鼠甲状腺TSHR蛋白表达上调;与模型组比较,大补元煎高剂量组TSHR蛋白表达上调,而大补元煎中、低剂量组大鼠甲状腺TSHR蛋白表达下调。5.肝脏1型、3型脱碘酶基因mRNA表达及酶的活性检测:与空白组比较,模型组大鼠肝脏D1基因mRNA表达下调,D3基因mRNA表达有下调;与模型组比较,大补元煎高、低剂量组大鼠肝脏D1基因mRNA表达上调,大补元煎中剂量组大鼠肝脏D1基因mRNA表达上调,大补元煎高、中、低剂量组大鼠肝脏D3基因mRNA表达均有下调。与空白组比较,模型组大鼠肝脏Ⅰ型脱碘酶活性明显减弱(P<0.01),Ⅲ型脱碘酶活性有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,大补元煎中剂量组、大补元煎低剂量组大鼠肝脏Ⅰ型脱碘酶活性增强(P<0.05);大补元煎各剂量组大鼠肝脏Ⅲ型脱碘酶活性有降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.中医元气与下丘脑-垂体-甲状腺(HPT)轴功能上部分类似。2.右侧肾切除术大鼠呈现元气虚损证相似证候。3.大补元煎对右侧肾切除术大鼠有改善作用,影响下丘脑-垂体-甲状腺轴可能是其发挥培元固本作用的机制之一。
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