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纤细双瓣线虫是松鼠猴体内常见的寄生虫,感染后可引起宿主营养不良和进行性消瘦,严重感染时可导致死亡,给松鼠猴的健康与安全造成了严重的威胁。目前,国内外对该虫仅有少量形态学的描述,在分子鉴定与线粒体基因组等方面未见任何报道。本研究针对广州某动物园自然死亡的松鼠猴体内疑似双瓣线虫虫体进行形态学和分子生物学鉴定,以便确诊该病原;采用PCR方法扩增其线粒体全基因组序列并进行序列分析,为进一步研究双瓣属线虫的分子鉴定和分子诊断提供科学依据。1.松鼠猴双瓣线虫的种类鉴定。采用镜检法对广州某动物园死亡松鼠猴体内采集的虫体进行形态观察,发现该虫形态特征与双瓣属线虫的形态特征一致。根据已发表的双瓣属线虫保守区cox1序列设计引物CX1（F）:5’-GACCAGGAAGTAGTTGAA-3’和CX1（R）:5’–CAGCCTCACTAATAATACCA-3’对其相应片段进行PCR扩增和序列分析。结果显示其扩增片段大小为632 bp,与登录号为KP760182的Dipetalonema gracile（纤细双瓣线虫）cox1序列的同源性最高（98.9%）;进化树显示该虫与Dipetalonema gracile位于同一分支。因此该虫鉴定为纤细双瓣线虫。2.纤细双瓣线虫线粒体全基因组序列分析。采用普通PCR和长片段PCR方法扩增并获得纤细双瓣线虫线粒体全基因组序列。其全长为13584 bp,包含22个tRNA基因、12个蛋白编码基因和2个rRNA基因;其核苷酸组成分别为:A=16.89%,G=20.19%,T=56.22%,C=6.70%和A+T=73.12%;12个蛋白编码基因主要以TTG和ATT作为起始密码子,以TAG和TAA作为终止密码子;tRNA基因中trnS1AGN和trnS2UCN的DHU环缺失、呈现D-loop结构,其余20个tRNA基因的TΨC环缺失,呈现TV-loop结构;rrn L和rrnS基因呈单链,二级结构保守,其大小分别为986 bp和678 bp。以管圆线虫为外群,基于旋尾目4属12种线虫的cox1基因采用ML法和MP法构建系统发育进化树。结果显示纤细双瓣线虫位于旋尾目、盘尾科的双瓣属分支内,双瓣属与布鲁属、丝状属和恶丝属各自形成独立的分支,表明其属于不同的进化群。本研究对某动物园死亡松鼠猴体内查获的纤细双瓣线虫进行了虫种鉴定,首次扩增分析了该虫线粒体全基因组序列,基于cox1基因构建了系统发育进化树。上述研究提供了该虫分子鉴定的资料,丰富了双瓣属线虫的线粒体基因数据库,为进一步研究双瓣属线虫的分子鉴定和分子诊断提供了科学依据。