研究证实,严重创伤或感染后发生明显的GCR（GR表达或功能下调）、炎症介质（NF-κB、AP-1）功能增强和炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6等）大量分泌,三者相互影响,互为因果,形成级联式放大效应,引发SIRS。SIRS是创伤或感染后天然免疫反应过度激活所致,是导致继发性全身性损害的主要原因。伴随SIRS的发生发展,由于内源性抗炎症介质的过量释放,可引起机体发生以细胞免疫为主的免疫功能抑制。因此,深入探讨SIRS发生发展及随后免疫抑制的分子机制,具有重要的临床意义。SRC家族作为核受体和其它转录因子的转录辅活化子,由SRC-1、SRC-2和SRC-3组成,以配体依赖模式与核受体相互作用,通过组蛋白乙酰化/甲基化和募集另外的辅因子,显著增强核受体依赖的转录。尽管目前关于SRC蛋白在调节机体生长发育、能量代谢以及部分肿瘤形成等方面的研究已积累了很多资料,但关于它在炎症/免疫反应中的作用,目前知之甚少。我们通过海外合作的方式从美国休斯顿贝勒医学院成功引进SRC-3基因敲除小鼠的亲代小鼠,并进行了繁殖。在成功繁殖并鉴定的基础上,我们分两个部分探讨了SRC-3在炎症和免疫反应中的作用。首先分别从体内、体外两方面探讨了SRC-3在SIRS发生发展中的作用:1)以5mg/kg体重LPS腹腔注射为炎症反应动物模型,观察SRC-3基因敲除对炎症反应早期炎性细胞因子分泌及肝、脾组织中GR、NF-κB、AP-1表达及核转位的影响;2)在腹腔巨噬细胞原代培养的基础上,在10μg/ml培养体系LPS诱导下,从炎性细胞因子的基因转录、炎症介质的活性等方面观察了SRC-3蛋白缺失对腹腔巨噬细胞激活的影响。其次通过细菌负荷实验观察了SRC-3在天然免疫反应中的作用,并在此基础上,进一步通过烧伤和LPS诱导炎症反应模型,探讨SRC-3与机体免疫功能抑制的关系。主要结果:1、在成功繁殖逐渐扩大种群的基础上,通过PCR和Western blot方法分别对子代小鼠进行基因表型和蛋白表型鉴定,成功获得一批SRC-3基因敲除小鼠,为下步实验打下了良好的基础;2、SRC-3^+/+小鼠肝、脾组织均表达SRC-3蛋白,且脾组织表达水平显著高于肝组织,超出约55.8%;3、5mg/kg LPS腹腔注射后,SRC-3^-/-组小鼠一般情况较SRC-3^+/+组小鼠轻,两组肝、脾、肾、心肌及胸腺病理变化未见明显差别;4、LPS腹腔注射后1h、4h两组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的水平均显著升高,但SRC-3^+/+组、SRC-3^-/-组小鼠相比,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平SRC-3^-/-组显著低于SRC-3^+/+组,IL-10水平SRC-3^-/-组却显著高于SRC-3^+/+组;5、正常情况下,SRC-3^+/+组腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA与SRC-3^-/-组相比,表达差异无统计学意义;体外LPS刺激后两组表达水平均显著升高,其中SRC-3^-/-组TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA显著低于SRC-3^+/+组,IL-10 mRNA显著高于SRC-3^+/+组;6、在肝组织,无论是SRC-3^+/+组小鼠还是SRC-3^-/-组LPS刺激引起GR蛋白表达及核转位均显著降低,但SRC-3^-/-组下降幅度显著低于SRC-3^+/+组;同样,LPS刺激后SRC-3^-/-组脾组织GR表达水平下降幅度显著低于SRC-3^+/+组,SRC-3^+/+组小鼠GR核转位明显降低,而SRC-3^-/-组无显著变化;7、LPS刺激早期两组小鼠肝、脾组织IκB-α蛋白水平显著降低,以1h降低最明显,其中SRC-3^-/-组小鼠下降幅度显著低于SRC-3^+/+组;两组小鼠肝、脾组织NF-κB p65/p50蛋白表达水平及核转位程度显著增加,SRC-3^+/+组、SRC-3^-/-组相比,SRC-3^-/-组小鼠NF-κB p65/p50蛋白表达上升幅度显著大于SRC-3^+/+组,而核转位程度显著低于SRC-3^+/+组;无论是SRC-3^+/+组还是SRC-3^-/-组小鼠,LPS刺激引起肝、脾组织IRF-1蛋白表达水平显著增加,并且在相应时相点SRC-3^-/-组小鼠均显著低于SRC-3^+/+组;8、SRC-3^+/+组、SRC-3^-/-组小鼠肝、脾组织在LPS刺激后c-Jun/c-Fos蛋白表达及核转位程度均显著增加,1h为峰值,在相应时相点SRC-3^-/-组小鼠均显著低于SRC-3^+/+组;9、LPS刺激后SRC-3^+/+组、SRC-3^-/-组小鼠肝组织SRC-1蛋白表达均显著降低,SRC-3^-/-组小鼠变化程度显著小于SRC-3^+/+组;肝组织SRC-1蛋白核内水平在SRC-3^+/+组小鼠明显降低,而SRC-3^-/-组小鼠却显著增加;两组脾组织均未明确检测到SRC-1蛋白表达;10、LPS刺激后SRC-3^-/-组小鼠SRC-2蛋白表达及核内水平在相应时相点均显著高于SRC-3^+/+组,其中在肝组织,SRC-3^+/+组、SRC-3^-/-组小鼠均显著增加,而在脾组织,SRC-3^+/+组降低,SRC-3^-/-组升高;11、正常情况下,SRC-3^+/+组腹腔巨噬细胞GR蛋白表达水平与SRC-3^-/-组相比无显著差异,LPS刺激4h后两组均显著降低,但SRC-3^-/-组降低程度显著低于SRC-3^+/+组;12、正常情况下,SRC-3^+/+组腹腔巨噬细胞NF-κB p65显著高于SRC-3^-/-组,LPS刺激4h后两组表达水平均显著升高,但SRC-3^-/-组升高幅度远远高于SRC-3^+/+组;13、正常情况下,SRC-3^+/+组腹腔巨噬细胞c-Jun/c-Fos蛋白表达水平与SRC-3^-/-组相比无显著性差异,LPS刺激4h后两组表达水平均显著升高,但SRC-3^-/-组升高幅度远远低于SRC-3^+/+组;14、通过细菌清除实验发现,SRC-3^-/-小鼠血液中活菌量显著多于SRC-3^+/+小鼠;注射后24h、48h SRC-3^-/-小鼠肝、脾及胸腺组织内细菌含量显著多于SRC-3^+/+小鼠,而肾组织中细菌含量均较少,两者相差不显著;15、正常情况下,两组小鼠血浆IL-2、sIL-2R水平没有显著差别;15%-20%Ⅲ°烧伤后24h,无论是SRC-3^+/+组还是SRC-3^-/-组,血浆IL-2、sIL-2R水平均显著升高,其中SRC-3^-/-组小鼠血浆IL-2显著低于SRC-3^+/+组,血浆sIL-2R含量升高幅度却显著大于SRC-3^+/+组;5mg/kg体重LPS刺激24h后,无论是SRC-3^-/-组小鼠还是SRC-3^+/+组,血浆IL-2水平均未见显著变化,而血浆sIL-2R含量却均显著升高,且SRC-3^-/-组小鼠升高幅度显著高于SRC-3^+/+组;16、正常情况下,SRC-3^-/-组小鼠外周血、脾脏和胸腺CD3⁺、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺比值不同程度降低,CD8⁺升高;烧伤或LPS刺激后24h两组小鼠外周血和脾脏CD3⁺、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺比值均不同程度下降,且SRC-3^-/-组CD3⁺、CD4⁺显著低于SRC-3^+/+组,CD4⁺/CD8⁺比值与SRC-3^+/+组相比无显著差别。结论:1、SRC-3与炎性细胞因子的合成释放有关,其蛋白缺失可抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6的基因转录及释放,改善炎症反应中机体的整体效应,缓解腹腔巨噬细胞的激活程度;2、SRC-3对GR蛋白表达及核转位有抑制作用,LPS刺激后GR蛋白表达及核转位显著降低,产生明显的GCR,SRC-3蛋白缺失可缓解其程度;3、SRC-3对NF-κB炎症信号转导通路有正性调控作用。SRC-3蛋白缺失可通过抑制炎症反应早期IκB-α水平下调,减少NF-κB核转位,从而导致其基因转录调控功能下降;4、SRC-3参与AP-1炎症信号转导通路的激活,SRC-3蛋白缺失可抑制LPS诱导的AP-1蛋白表达水平及活性,这可能是由于TNF-α、IL-1β等致炎细胞因子合成释放相对不足所致;5、SRC家族成员间存在相互补偿,SRC-1、SRC-2对SRC-3蛋白缺失具有不同程度的补偿效应,但这种补偿效应是有限的;6、SRC-3在维持机体正常的免疫反应中起重要作用。SRC-3缺失可抑制炎性细胞因子的转录和释放,引起对细菌及产物的吞噬及清除功能下降,导致天然免疫功能减弱,同时引起CD3⁺、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺比值显著下降,使细胞免疫功能低下;7、SRC-3可能通过“双向性”作用精细地调节着细胞免疫,其缺失一方面可促进IL-10表达,导致机体免疫功能抑制加重,另一方面可减轻CD3⁺、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺比值的下降程度,也表明SRC-3可能部分参与了SIRS后免疫抑制的发生发展。