【摘 要】
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根茎冰草(Agropyron michnoi Roshev.)为冰草属多年生根茎型或根茎-疏丛型草本植物,四倍体(2n=28),属于草原旱生植物类群,主要生长在草原及荒漠草原地区。MYB类转录因子在植物对逆境胁迫的调控过程中起着非常重要的作用。本研究利用同源序列克隆法从根茎冰草中分离MYB类转录因子基因,并对其表达特征和功能进行深入分析。具体研究结果如下:1从根茎冰草中克隆得到1个具有1R结构的M
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根茎冰草(Agropyron michnoi Roshev.)为冰草属多年生根茎型或根茎-疏丛型草本植物,四倍体(2n=28),属于草原旱生植物类群,主要生长在草原及荒漠草原地区。MYB类转录因子在植物对逆境胁迫的调控过程中起着非常重要的作用。本研究利用同源序列克隆法从根茎冰草中分离MYB类转录因子基因,并对其表达特征和功能进行深入分析。具体研究结果如下:1从根茎冰草中克隆得到1个具有1R结构的MYB转录因子基因AmrMYBR1和1个具有R2R3结构的MYB转录因子基因AmrR2R3MYB。AmrMYBR1基因最大开放阅读框长度为783bp,编码260个氨基酸,基因蛋白分子量为28.59KD,等电点为7.78。AmrR2R3MYB基因的最大开放阅读框为969bp,编码323个氨基酸,基因蛋白分子量为35.45KD,等电点为5.58。均为为亲水不稳定蛋白。蛋白序列比对和进化树分析结果表明AmrR2R3MYB基因的蛋白保守性较高,这两个基因都与小麦族植物的MYB蛋白亲缘关系较近。2利用qRT-PCR技术对AmrR2R3MYB基因表达特征进行分析,结果表明,AmrR2R3MYB基因在组织特异性表达中,叶片中的表达量最高,其次是茎、根,穗中表达量最低;该基因受干旱胁迫、激素ABA诱导表达,为正调控,在盐胁迫和激素GA处理条件下,AmrR2R3MYB基因的表达量下调;低温对AmrR2R3MYB基因的表达影响不显著。3利用拟南芥原生质体瞬转技术检测AmrR2R3MYB基因的转录激活能力和对靶基因的调控作用,结果显示:AmrR2R3MYB基因具有自激活功能,AmrR2R3MYB基因可以上调应激反应基因ERD10、RD17、RD22、RD29B、COR15A的表达。4通过构建p CAMBIA1300-AmrR2R3MYB-c YFP载体,瞬时转染烟草叶片,观察发现AmrR2R3MYB定位在细胞核内。5构建融合表达载体p CAMBIA1302-AmrMYBR1,瞬转水稻原生质体,亚细胞定位结果表明,AmrMYB1定位在细胞核及细胞质中。将p CAMBIA1302-AmrMYB1转入水稻,经过筛选鉴定后,得到23株T0代转基因水稻,获得T1代转基因水稻种子,待进一步进行功能研究。本研究丰富了冰草属的抗性基因,为根茎冰草优异基因的挖掘和利用提供有力依据。
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