肌肉是家禽生产中重要的经济性状之一,胚胎期骨骼肌的发育影响肌肉产量。鸡GHR基因可双向转录,不仅具有GHR mRNA(即GHR正义转录本,G HR-S),而且存在一种天然反义转录本(GHR-AS),两种转录本部分序列反向互补,且存在互作。目前GHR-AS在骨骼肌发育过程中的作用尚不清楚,本研究首先从组织水平分析GHR-AS的表达规律,然后采用差速贴壁法分离怀乡鸡腿肌的原代成肌细胞,分析GHR-AS对成肌细胞分化过程中的影响及可能的调控机制。论文主要研究结果如下:(1)GHR-AS在鸡胚胎期的表达量比出壳后高,鸡胚胎E12-E17是肌纤维形成的关键时期,表明GHR-AS可能参与鸡骨骼肌发育过程。比较GHR-AS和G HR-S(GHR mRNA)的表达规律发现两者呈显著正相关关系。在肌肉组织中G HR-AS的表达量低于GHR-S,且差异显著(P<0.05)。(2)用含2%马血清的DMEM培养基诱导怀乡鸡成肌细胞向肌纤维分化;在增殖期、分化期进行亚细胞定位和半衰期检测,发现GHR-AS在细胞核中的表达量高于细胞质,且GHR-AS的稳定性低于GHR-S。(3)在鸡成肌细胞分化过程中GHR-AS表达量呈上升趋势。成肌细胞转染过表达载体pGHR-AS后发现GHR-AS促进成肌细胞分化,且分化标记基因MyHC表达量呈上升趋势,表明GHR-AS对肌纤维的形成具有促进作用。(4)在鸡原代成肌细胞中添加鸡GH蛋白后,GHR-AS表达量升高,下游IGF1在mRNA和蛋白质水平均升高,成肌细胞分化标志基因MyHC表达量显著上升,表明GHR-AS可能通过GH-GHR-IGF1通路在成肌细胞分化过程中起作用。5-杂氮-2’-脱氧胞苷能够使成肌细胞中的GHR-AS表达量显著上升且成肌细胞的分化过程增强,表明GHR-AS受甲基化调控,去甲基化后有助于肌纤维的形成。本研究发现GHR-AS参与骨骼肌的发育过程,研究结果为家禽骨骼肌发育调控、确立肌肉发育的分子育种新靶点提供理论依据。