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研究背景中药学自古就有道地药材的说法,说明药材的产地、环境等客观因素对中药材质量有影响,有效成分含量有所差别。高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是现代分析仪器,具有效率高、速度快、灵敏度高、操作自动化的特点,可反映药材所含化学成分的种类和测定成分的含量,实现中药材的质量评价。半枝莲(Herba Scutellariae Barbatae)是唇形科(Labiatae)植物半枝莲(Scutellaria barbatae D.Don)的干燥全草,在中医临床主要用半枝莲配伍其他清热解毒药治疗肝癌、肺癌等疾病。黄酮类化合物是半枝莲含量最多和最主要的活性物质,具有抑制肿瘤细胞增殖、影响药物代谢酶活性、诱导细胞凋亡等作用。本文选取了半枝莲中四种主要的黄酮成分(Scutellariae Barbatae flavonoids,SBF),分别是野黄岑苷、黄芩素、木犀草素、芹菜素,建立了半枝莲四种黄酮成分的含量测定方法,并检测12批不同产地的半枝莲中四种黄酮成分含量。白血病是常见的血液系统恶性疾病,治疗手段主要以化疗、造血干细胞移植为主,但治疗副作用大且复发率高,移植配型难度大,且医疗费用高昂。中药在治疗白血病方面有独特的功效,半枝莲常用于中医治疗白血病。研究表明半枝莲提取物可抑制白血病细胞K562增殖并诱导凋亡,降低肿瘤细胞的多药耐受性,并且多种药材的黄酮类成分可抑制白血病细胞增殖诱导凋亡。本研究首次探索半枝莲黄酮成分对白血病U937细胞增殖凋亡的影响,探讨可能的促细胞凋亡机制,为应用于临床治疗提供理论依据。目的本研究建立SBF含量同时测定的HPLC方法,检测12批不同产地的半枝莲中四种黄酮成分含量;研究SBF对白血病细胞U937的增殖、周期和凋亡的影响,RT-PCR检测SALL4基因和Wnt/β-Catenin信号通路下游靶基因c-myc、CCND1的表达,探究可能的促细胞凋亡机制。研究方法用HPLC法检测四种主要黄酮成分含量,并进行方法学考察;体外培养白血病细胞U937,用倒置生物显微镜观察SBF对U937细胞形态的影响;采用CCK-8检测SBF对U937存活率的影响;流式细胞术检测SBF对细胞周期和凋亡的影响;RT-PCR检测SBF对U937细胞中促凋亡相关基因表达的影响结果1.建立了 HPLC同时测定半枝莲四种黄酮成分的含量测定方法,方法学考察良好。2.倒置生物显微镜的观察结果显示,随着浓度和时间的增加,细胞数量减少,体积皱缩变小,碎片增多。3.SBF能够呈现时间和剂量依赖性显著抑制U937细胞增殖。4.SBF溶、液作用于 U937 细胞24h后,能将U937 细胞阻滞于Go/G1期,随着药物浓度的增加,阻滞的效果越明显(P<0.01)。与对照组相比,SBF溶液能够诱导U937细胞发生凋亡(P<0.01)。5.与对照组比较,SBF能够下调细胞中SALL4、C-myc、CCND1基因表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论1.建立了半枝莲四种黄酮成分的含量测定方法,为半枝莲药材质量分析提供手段。2.SBF能够呈浓度和时间依赖性显著抑制U937细胞增殖,下调U937细胞中SALL4、c-myc、CCND1基因的表达水平,诱导细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。