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目的:采用体外实验探讨扶正祛邪抑癌方含药血清对人肝癌细胞HepG2中MAPK通路关键蛋白ERK、JNK表达水平和磷酸化水平的影响,寻找名老中医经验方——扶正祛邪抑癌方防治肝癌的可能机制,为临床治疗肝癌提供更多的实验理论依据,从而为肝癌的临床治疗提供经济有效的药物。方法:1.扶正祛邪抑癌方含药血清的制备:将雄性Sprague-Dawley大鼠(简称SD大鼠)40只,适应性喂养一周后,体重在250-370g,随机分为4组:对照组、扶正祛邪抑癌方低剂量组、扶正祛邪抑癌方中剂量组、扶正祛邪抑癌方高剂量组(以下分别简称FZ低剂量组、FZ中剂量组、FZ高剂量组),每组10只,每天早晚灌胃各一次。对照组给予生理盐水灌胃,其余各组给予不同剂量的扶正祛邪抑癌方浸膏灌胃,连续灌胃5天后腹主动脉取血,-80℃冰箱分组保存。2.扶正祛邪抑癌方含药血清对人肝癌细胞HepG2作用机制的研究:将人肝癌细胞HepG2复苏,培养至对数生长期后分为4组:对照组、FZ低剂量组、FZ中剂量组、FZ高剂量组,分别加入不同浓度的扶正祛邪抑癌方含药血清,收集上清液及细胞。采用CCK8法检测人肝癌细胞HepG2增殖;Annexin v-FITC/PI双染流式细胞法检测人肝癌细胞HepG2凋亡;RT-PCR法检测各组细胞Bcl-2、Bax mRNA的表达;Western Blot法检测各组细胞ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表达,实验重复三次。采用SPSS 26.0统计学软件,统计并分析数据。结果:1.扶正祛邪抑癌方含药血清可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并呈剂量、时间依赖性,与对照组的细胞增殖抑制率相比,差异有统计学意义(p<0.05);2.不同浓度扶正祛邪抑癌方含药血清可诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,且随药物浓度增加,细胞凋亡率逐渐增加,与对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05);3.不同浓度扶正祛邪抑癌方含药血清对人肝癌细胞HepG2中凋亡相关蛋白的基因表达的影响:各组细胞内Bcl-2、Bax mRNA的表达有所不同,与对照组相比,各剂量扶正祛邪抑癌方含药血清组Bcl-2 mRNA的表达有所降低,随药物浓度增加而降低,Bax mRNA的表达有所增加,随药物浓度增加而升高,差异有统计学意义(p<0.05);4.不同浓度扶正祛邪抑癌方含药血清对人肝癌细胞HepG2中MAPK信号通路的影响:与对照组相比,各剂量扶正祛邪抑癌方含药血清组中ERK,p-ERK蛋白表达量均有所下降,差异有统计学意义(P<0.001);各剂量含药血清组之间比较,随着药物剂量的增加,ERK,p-ERK表达逐渐下降,差异具有统计学意义(P<0.001)。与对照组相比,各剂量含药血清组中JNK、p-JNK蛋白表达量均有所上升,差异有统计学意义(P<0.001);各剂量含药血清组之间比较,随着药物剂量的增加,p-JNK表达呈现逐渐上升的趋势,差异具有统计学意义(P<0.001),但JNK表达在各剂量含药血清组之间比较无明显差异(P﹥0.05)。结论:扶正祛邪抑癌方含药血清可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡的机制可能是通过同时下调ERK/MAPK通路、上调JNK/MAPK通路来实现,从而达到抑制肝癌体内体外的增殖。