西氏贝蛔虫(Baylisascaris schroederi)是危害圈养大熊猫最主要的寄生虫。大熊猫感染该蛔虫后的主要症状表现为精神沉郁,食欲减退,消瘦等,严重感染时可引起大熊猫死亡。目前对大熊猫西氏贝蛔虫病的诊断主要依靠粪便漂浮法和PCR方法检测粪样中的虫卵,但以上方法不能进行早期诊断。本研究进行了西氏贝蛔虫脂肪酸结合蛋白基因和半乳糖凝集素基因的扩增与原核表达、免疫印迹和荧光免疫组化定位分析,并评价了西氏贝蛔虫脂肪酸结合蛋白和半乳糖凝集素的诊断价值,为西氏贝蛔虫早期诊断方法的建立奠定了基础。一、西氏贝蛔虫脂肪酸结合蛋白基因的原核表达及重组蛋白诊断价值的初步评价脂肪酸结合蛋白属于胞质脂肪酸结合蛋白大家族,能够特异性地结合脂肪酸及一些疏水的配基,并转运细胞膜上的脂肪酸,促进酯化反应。本研究从西氏贝蛔虫成虫的总RNA中扩增出脂肪酸结合蛋白基因,基因的ORF框有438 bp,共编码145个氨基酸,脂肪酸结合蛋白蛋白的分子质量为16.7 KDa,其氨基酸序列与猪蛔虫的脂肪酸结合蛋白序列相似性达92%。在大肠杆菌中表达的重组脂肪酸结合蛋白分子质量大约为34 KDa。荧光免疫组化结果显示脂肪酸结合蛋白主要集中在西氏贝蛔虫成虫肠道及卵巢壁,在虫体其余部分也有分布。间接ELISA结果显示该方法具有较高的敏感性95.8%(23/24)和特异性100%(12/12),可作为检测西氏贝蛔虫病的候选诊断抗原。二、西氏贝蛔虫半乳糖凝集素基因的原核表达及重组蛋白诊断价值的初步评价半乳糖凝集素是广泛存在于从低等原生动物到高等脊椎动物等多种生物体内的各种组织细胞中,在细胞黏附、细胞凋亡、炎症反应等许多生理及病理过程中发挥重要的作用。本试验通过转录组数据中的半乳糖凝集素基因序列设计特异性引物,从西氏贝蛔虫成虫的总RNA中扩增出半乳糖凝集素基因,其ORF框有429 bp,共编码142个氨基酸,半乳糖凝集素的分子质量为16.1 KDa,氨基酸序列与猪蛔虫该蛋白的序列相似性为76%。在大肠杆菌中原核表达出的西氏贝蛔虫重组半乳糖凝集素,其分子质量大约34 KDa。荧光免疫结果显示半乳糖凝集素在西氏贝蛔虫成虫体壁、子宫及虫卵等位置均有大量分布。间接ELISA结果显示:敏感性91.7%(22/24),特异性 100%(12/12)。