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[目的]本研究分为两个部分,第一部分探讨CaMKⅡ表达调控对大鼠肝胞BRL-3A凋亡的影响;第二部分探讨CaMK Ⅱ表达调控对大鼠肝移植术后肝功能及细胞凋亡的影响。[方法](1)通过培养稳定传代的大鼠肝细胞BRL-3A系,并构建CaMKⅡ γ shRNA(A组)和CaMKⅡ γ蛋白(B组)的慢病毒表达体系,转入大鼠肝细胞BRL-3A内,同时予以灌注相应的空白载体(C组、D组)及空白对照(E组)形成对照,通过Western blot法检测各组CaMKⅡ、CytC、AIF蛋白的表达,并通过Tunel法检测大鼠肝细胞BRL-3A凋亡率。(2)采用经典二袖套法建立SD至SD大鼠同种异体原位肝移植模型,分别将表达CaMKⅡγ shRNA的慢病毒载体(A组)及表达CaMKⅡγ蛋白的慢病毒载体(B组)转染至肝移植术后大鼠体内,同时予以灌注相应的空载体(C组、D组)及生理盐水(E组)形成对照,分别于术后不同时间点取大鼠下腔静脉血测定检测各组ALT、AST水平,同时取大鼠肝组织测定CaMKⅡ、Cyt C、AIF蛋白的表达量和肝细胞凋亡率。[结果](1)在体外实验中,灌注CaMKⅡ γ shRNA慢病毒组(A组)的CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较空白对照(E组)显著降低(均p<0.05);灌注CaMKⅡ γ蛋白慢病毒组(B组)的CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较空白对照组(E组)显著增多(均p<0.05);而灌注相应空白载体组(C组、D组)与空白对照组(E组)间比较无显著差异(p>0.05)。同一时点A组肝细胞凋亡较E组少、差异有统计学意义(p<0.05);同一时点B组肝细胞凋亡率较E组多,差异有统计学意义(p<0.05);C组、D组和E组肝细胞凋亡率有差异但无统计学意义(p>0.05)。(2)通过对肝移植术后大鼠盲肠静脉灌注病毒转染成功后,灌注表达CaMKⅡ γ shRNA的慢病毒载体组(A组)的移植术后大鼠血清ALT及AST较灌注生理盐水组(E组)降低(P<0.05),其CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量明显低于E组(P<0.05),且肝细胞凋亡率也较E组低;灌注表达CaMKⅡ γ蛋白慢病毒组(B组)的移植术后大鼠血清ALT及AST较E组升高(P<0.05),其CaMKⅡ、CytC、AIF的蛋白表达量明显高于E组(P<0.05),且肝细胞凋亡率也较E组高;而灌注相应空载体组(C、D组)与E组移植后大鼠血清ALT,AST的水平,CaMKⅡ、CytC、AIF的蛋白表达量以及肝细胞凋亡率均无明显差异(均P>0.05)。[结论](1)体外实验中,CaMKⅡ信号通路的阻断可抑制肝细胞BRL-3A凋亡;而CaMKⅡ信号通路的增强则促进肝细胞BRL-3A凋亡。(2)体内实验中,特异性阻断CaMKⅡ信号通路可有效降低大鼠肝移植术后血清ALT、AST水平及肝细胞内CytC、AIF蛋白表达、以及细胞凋亡率;而增强的CaMKⅡ信号通路则提高大鼠肝移植术后血清ALT、AST水平及肝细胞内CytC、AIF蛋白表达、以及细胞凋亡率。体内外实验均证明抑制CaMKⅡ的表达可有效减少肝移植术后肝功能的损害以及肝细胞的凋亡,这为临床上治疗肝移植术后肝功能不全以及肝细胞凋亡的防治提供新的理论基础。