糖结合蛋白基因芯片的制备与应用

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研究背景:细胞表面糖链与蛋白质的相互作用促进了细胞与细胞间的粘附、参与了脊椎动物胚胎发育等。这种与糖链相互作用的蛋白被称为糖结合蛋白。糖结合蛋白通过与糖蛋白糖链或糖脂糖链的相互作用调控细胞识别、信号传递、细胞内吞以及细胞生长、分化和凋亡等生物学行为。肝癌具有不易早期发现、易转移、发展快、治疗难度大等特点。肝癌发生时,蛋白质和脂分子糖基化的异常导致糖链发生了结构和数量的改变,相应地和这些糖链相互作用的糖结合蛋白的表达也发生异常改变。从糖结合蛋白基因水平入手研究肝癌发生时细胞中糖结合蛋白基因表达水平的变化,有助于了解糖结合蛋白与糖链分子间相互作用的分子机制和寻找新的肝癌标志物,为肝癌的早期诊断和基因治疗奠定基础。方法:应用高通量的基因芯片技术作为检测手段,筛选肝癌中差异表达的糖结合蛋白基因。设计和制备糖结合蛋白基因芯片(包含135条糖结合蛋白基因和25个质控点)。以L02正常肝细胞系和HepG2、SMMC-7721两种肝癌细胞系及健康志愿者和肝癌患者血液作为研究对象,系统地研究肝癌样本与正常样本中糖结合蛋白基因发生的变化,筛选出肝癌样本中异常表达的糖结合蛋白基因,并用实时荧光定量PCR技术验证基因芯片的结果。结果:L02正常肝细胞系和HepG2肝癌细胞差异表达的糖结合蛋白基因24个,其中上调基因15个,下调基因9个。L02正常肝细胞系和SMMC-7721肝癌细胞系差异表达的糖结合蛋白基因15个,其中上调基因9个,下调基因6个。肝癌患者和健康志愿者血液样本中差异表达的糖结合蛋白基因17个,其中上调基因9个,下调基因8个。两组细胞样本和血液样本中共同的上调基因有7个,共同的下调基因有3个。从中挑选出四个表达差异较大的基因,上调基因三个(ALPP, Galectin-1和MGL),下调基因为REG4,用实时荧光定量PCR技术验证四个基因的表达水平,结果与芯片结果一致。结论:将糖结合蛋白基因芯片与实时荧光定量PCR等技术运用于肝癌糖结合蛋白基因表达谱的研究,筛选出10个差异表达的糖结合蛋白基因。试验中设计及制备的糖结合蛋白基因芯片,也为其它疾病的研究建立了技术平台。
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